какой качественной реакцией можно открыть присутствие глюкозы в моче
3. Качественные реакции на глюкозу в моче
Химизм реакции Фелинга:
Глюкоза (желтый осадок)
Химизм реакции Ниландера:
Глюкоза (черный цвет)
К I мл исследуемой мочи приливают 0,5 мл реактива Фелинга, нагревают пробирку до кипения. В случае положительной реакции на глюкозу наблюдается красное окрашивание вследствие образования оксида меди (Сu2O).
К I мл исследуемого раствора (мочи) приливают 0,5 мл реактива Ниландера, нагревают пробирку до кипения и кипятят 2 минуты, в случае положительной реакции на глюкозу наблюдается выпадение черного осадка, вследствие образования свободного Bi.
4.Количественное определение глюкозы в моче с помощью тест-полосок «Глюкотест», «Глюкофан».
Определение основано на специфической энзиматической реакции с использованием ферментов глюкозоксидазы и пероксидазы. Окисление глюкозы атмосферным кислородом катализируется ферментом глюкозооксидазой. При этом образуется глюконолактон и Н2О2. Пероксид водорода в последующей реакции, катализируемой ферментом пероксидазой, окисляет хромогенную систему с образованием интенсивно окрашенных продуктов реакции.
Тест реагирует появлением интенсивного красно-коричневого окрашивания на концентрацию глюкозы 2 ммоль/л и выше. Концентрация 1,7 ммоль/л в первой утренней порции мочи принята за верхний предел физиологической глюкозурии. Тест специфичен для глюкозы.
Оценка теста: тест считается положительным при изменении цвета реактивной зоны. В зависимости от концентрации глюкозы в пробе исходная желтая окраска реактивной зоны меняется на красновато-коричневую или коричнево-красную. Отдельные зоны окраски соответствуют следующим концентрациям: менее 2, 6, 17, 56, более 170 ммоль/л.
Полоску бумаги «Глюкофан» погружают в исследуемую мочу, затем высушивают на воздухе и через минуту сравнивают окраску индикаторной зоны с цветной шкалой.
Основан на слабой пероксидазной активности гемоглобина, который в кислой среде разлагает перекись водорода до воды и атомарного кислорода, который окисляет органическое вещество бензидин с образованием продуктов окисления желто-зеленого цвета.
В пробирку наливают 0,5 мл мочи и приливают к ней последовательно 0,2 мл 30% уксусной кислоты, 0,5 мл 5% спиртового раствора амидопирина и 0,2 мл 3% раствора перекиси водорода. Перемешивают, и при наличии крови в течение 5 минут появляется сине-фиолетовое окрашивание, которое затем исчезает.
Какой качественной реакцией можно открыть присутствие глюкозы в моче
Анализ выявляет в моче глюкозу, появляющуюся при патологии почек, эндокринной системы, побочном действии лекарств, отравлениях, осложненном течении беременности.
Тест на глюкозурию.
Синонимы английские
Urine glucose, urine glucose test, urine sugar test, glucosuria test.
Ферментативный УФ метод (гексокиназный).
Ммоль/л (миллимоль на литр).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Разовую порцию мочи.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Глюкоза относится к классу углеводов (сахаров) и служит в организме универсальным источником энергии. Ее название происходит от греческого слова glykys – «сладкий».
Глюкоза является мономером, в природе и у человека встречается как в составе ди- и полимеров, так и отдельно. Основная роль глюкозы в организме – энергетическая – участие в биохимических реакциях, обеспечивающих клетки организма энергией, – также она выполняет структурную функцию, входя в состав различных молекул.
Углеводы поступают в организм с едой. На их долю при сбалансированном питании приходится 75 % объема и 50 % калорийности суточного рациона. Углеводы пищи представлены крахмалом (полимер глюкозы, содержащийся в растительной пище), гликогеном (полимер глюкозы, содержащийся в животной пище), сахарозой (димер, состоящий из фруктозы и сахарозы), моносахарами (лактозы молока, фруктозы и глюкозы меда и фруктов). Углеводы могут образовываться из липидов и аминокислот, но этот процесс приводит к появлению кетоновых тел и азотистых продуктов, в больших количествах и при длительном действии неблагоприятно сказывающихся на состоянии организма. Также в печени содержится резерв гликогена. В ротовой полости и кишечнике сахара расщепляются, всасываются и далее поступают в кровь. Концентрация глюкозы в крови поддерживается на постоянном уровне взаимодействием гормонов. Как повышение, так и понижение глюкозы в крови опасно – возможна гипер- и гипогликемическая кома. В почках глюкоза попадает в первичную мочу, образующуюся при прохождении крови через корковое вещество почек (почечные клубочки). В мозговом веществе почки (канальцевой части) происходит практически полный переход глюкозы из первичной мочи в кровь (реабсорбция) при условии, что уровень глюкозы крови ниже определенного порога. В мочу глюкоза не попадает.
Существует два основных фактора, обуславливающих появление глюкозы в моче: повышение глюкозы крови выше почечного порога (гипергликемия) и нарушение реабсорбции глюкозы в почках в связи с их поражением. Возможно сочетание этих причин.
При заболеваниях почек, нарушающих работу нефрона, происходит неполная реабсорбция глюкозы и она появляется в моче. Встречается первичное поражение канальцев (тубулопатия) – редкое наследственное заболевание, при котором страдает способность к реабсорции некоторых веществ в почечных канальцах (синдром де Тони – Дебре – Фанкони, первичная глюкозурия), и вторичное поражение, когда нарушается функция почек в целом (гломерулонефриты, почечная недостаточность, отравления). Глюкозурия, связанная с работой почек, может обнаруживаться у беременных, особенно на поздних сроках. В этом случае для предотвращения осложнений обязательно наблюдение врача.
Увеличение содержания глюкозы в крови ведет к его увеличению в первичной моче, при превышении определенного порога даже здоровые почки не полностью реабсорбируют глюкозу, так что она попадает в мочу. Глюкоза крови может повышаться у здоровых людей при чрезмерном употреблении углеводов в пищу, стрессе, эпизодическом употреблении некоторых лекарств. В целом уровень глюкозы крови зависит от гормональной регуляции, и его колебания свидетельствуют о патологии эндокринной системы.
Гормоны, влияющие на обмен углеводов, принято делить на инсулин и контринсулярные. Действие инсулина направлено на снижение уровня глюкозы в крови: он способствует переходу глюкозы в ткани, стимулирует синтез гликогена и угнетает его расщепление до глюкозы, угнетает образование глюкозы из аминокислот и липидов. Инсулин синтезируется эндокринными клетками поджелудочной железы. При сахарном диабете нарушается синтез инсулина (инсулинозависимый сахарный диабет) или реакция на него клеток организма (инсулинонезависимый сахарный диабет), при удалении поджелудочной железы или ее значительном повреждении при панкреатите также развивается недостаточность инсулина. Это ведет к повышению глюкозы в крови и появлению глюкозы в моче. При лечении диабета добиваются стабильного уровня глюкозы крови, а глюкозурия может являться сигналом к коррекции терапии.
Контринсулярные гормоны – это глюкагон поджелудочной железы, кортизол коркового вещества надпочечников, адреналин мозгового вещества надочечников, соматотропин передней доли гипофиза, гормоны щитовидной железы. Их действие имеет ряд особенностей, но в целом в том, что касается метаболизма глюкозы, оно противоположно инсулину: стимуляция распада гликогена и инсулина, глюкоза синтезируется из липидов и аминокислот, ее уровень в крови повышается. Действие контринсулярных гормонов направлено на удовлетворение энергетических потребностей в период стресса, мышечного напряжения. К гипергликемии и появлению глюкозы в моче ведет повышение уровня контринсулярных гормонов. Это происходит при длительном приеме соответствующих препаратов (глюкокортикоидов, гормонов щитовидной железы, соматотропного гормона), при гормонпродуцирующих опухолях щитовидной железы, надпочечников, поджелудочной железы, гипофиза.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Причины повышения уровня глюкозы в моче:
Причины понижения уровня глюкозы в моче
У здоровых людей моча содержит крайне незначительное количество глюкозы. Полное исчезновение глюкозы происходит при бактериальных инфекциях мочевыводящих путей, однако на практике этот факт не учитывается в диагностических целях.
Имеет значение снижение глюкозы на фоне предшествующего повышения, что означает нормализацию уровня глюкозы в крови или стабилизацию функции почек.
Что может влиять на результат?
Кто назначает исследование?
Эндокринолог, нефролог, акушер-гинеколог, терапевт, педиатр.
Анализ мочи на диабет: что нужно знать
Людям с сахарным диабетом требуется периодическое исследование анализа мочи, во-первых, для определения наличия сахара в моче, во-вторых, для исключения инфекций мочевыводящих путей, которые часто встречаются у пациентов с сахарным диабетом и должны быть обязательно пролечены.
Анализ мочи неинвазивен, и люди часто проводят его дома. Тем не менее, медицинские работники могут использовать анализ мочи, если они не могут получить доступ к вене для анализа крови, или если у человека есть беспокойство или страх перед иглами.
В этой статье мы рассмотрим типы анализов мочи на диабет и то, как понять результаты.
Типы анализов
Анализ мочи может обнаружить различные вещества, включая глюкозу, кетоны, белок, бактерии и билирубин.
Глюкоза
В анализе мочи можно определить уровень глюкозы, кетонов и других веществ.
Как правило, глюкоза не присутствует в моче. Однако, когда у человека сахарный диабет, она может определяться в моче. Некоторые заболевания почек также могут сопровождаться появлением сахара в моче.
Беременность:
Во время беременности почти у половины женщин может определяться глюкоза в моче, даже при отсутствии у них сахарного диабета.
Женщина, у которой наблюдается глюкоза в моче во время беременности, должна обследоваться на наличие у нее гестационного сахарного диабета.
Это тип диабета, который встречается во время беременности и обычно он проходит после родов, но может оказывать негативное влияние на плод, привести к осложнениям во время родов и к более высокому риску развития сахарного диабета 2 типа в дальнейшей жизни.
Глюкозурия — это определение глюкозы в моче.
Кетоны
Когда у человека диабет, глюкоза в его крови не может проникнуть в клетки организма, и она остается в крови. Когда это происходит, клеткам не хватает глюкозы для получения энергии.
В результате организм начинает расщеплять жир, чтобы использовать его вместо энергии. Это производит токсичные кетоны. Если уровень кетонов поднимется слишком высоко, они могут привести к тому, что кровь станет слишком кислой. У человека с сахарным диабетом это может привести к диабетическому кетоацидозу (ДКА), требующему неотложного лечения.
Кетоны также могут попадать в мочу, поэтому врач может использовать анализ мочи для выявления ДКА. Люди с диабетом могут сделать анализ мочи дома, если они начинают испытывать признаки и симптомы ДКА.
Симптомы DKA включают в себя:
Любой, кто думает, что у них может быть ДКА, должен сначала проверить уровень сахара в крови. Если они превышают 240 миллиграммов на децилитр (мг / дл), ADA рекомендует тестировать на кетоны.
Если уровень кетонов высок, немедленно обратитесь за медицинской помощью, чтобы предотвратить развитие диабетической комы. Это касается пациентов с сахарным диабетом 1 типа.
Риск ДКА выше, когда человек, страдающий сахарным диабетом, заболевает ОРВИ или гриппом. В это время, согласно рекомендациям ADA, они должны проверять уровень кетонов каждые
Знание о самотестировании на глюкозу и кетоны может позволить человеку с диабетом лучше контролировать свое состояние.
Белок
Доктор может проверить анализ мочи на наличие в ней белка. Это связано с тем, что диабет повышает риск хронического заболевания почек (ХБП) и, в частности, диабетической нефропатии. Ранним признаком диабетической нефропатии является белок в моче.
Чем раньше человек узнает о заболевании почек, тем лучше будет прогноз.
Билирубин
Иногда анализ мочи может обнаружить билирубин, вещество, которое может указывать на повреждение печени и некоторые другие состояния здоровья.
Исследование, опубликованное в 2017 году выявляет связь между высоким уровнем билирубина у людей с диабетом и заболеваниями почек, ретинопатии и диабетической нейропатии, всех распространенных осложнений сахарного диабета.
Чего ожидать
Иногда анализ мочи называют тестом на щуп, потому что он включает погружение полосок в мочу и считывание результатов с использованием цветовой шкалы. Домашние тесты похожи на это.
В кабинете врача
Если тест-полоска меняет цвет, могут присутствовать кетоны, глюкоза или другое вещество.
В кабинете врача медицинский работник даст Вам чистую и прозрачную тару и попросит сделать следующее:
Врач окунет полоску в мочу, которая изменит цвет в соответствии с уровнем различных веществ в моче.
Врач сравнит полоску с цветовой шкалой, чтобы определить уровень глюкозы, кетонов и белка в моче.
Если рН мочи высокий, это может указывать на присутствие определенных бактерий. Тем не менее, врачу также может понадобиться отправить образец в лабораторию для культивирования, если они тестируют на ИМП. Это может выявить тип присутствующих бактерий и дать представление о том, какое лечение назначать.
Домашнее тестирование
Процедура немного отличается, если у Вас уже имеется диагноз диабета и Вы проводите анализ мочи в домашних условиях.
Дома Вы должны следовать инструкциям в наборе для тестирования, так как они могут различаться. Однако для проверки уровня кетонов, белков или глюкозы в моче, вероятно, потребуется цветная полоска и справочная таблица.
Вы должны сделать тест утром перед завтраком.
Важно отметить, что анализы мочи не показывают, являются ли уровни глюкозы в крови слишком низкими. Это может быть важно для людей, которые подвержены риску гипогликемии (низкий уровень глюкозы в крови). Те, кто использует инсулин или другие лекарства, возможно, должны следить за низким уровнем сахара в крови.
Результаты
Результаты теста позволят определить уровень глюкозы, кетонов и белка в моче.
Глюкоза
Врач может предложить скорректировать лечение в зависимости от результатов.
Если в анализе мочи определяют глюкозу, врач обычно проводит анализ крови на глюкозу и уровень гликированного гемоглобина (HbA1c), чтобы определить, есть ли у человека диабет. В спорных случаях может потребоваться проведение теста на толерантность к глюкозе (GTT), чтобы выявить более ранние нарушения углеводного обмена и заняться профилактикой сахарного диабета.
Если у человека высокий уровень глюкозы в моче, это может быть связано с диабетом. Если это так, у них также будет высокий уровень глюкозы в крови (гипергликемия).
В краткосрочной перспективе неконтролируемый высокий уровень сахара в крови может привести к таким симптомам, как жажда, учащенное мочеиспускание и повышенный риск развития ДКА. В долгосрочной перспективе это может привести к развитию микро- и макрососудистых осложнений сахарного диабета — поражению почек, глаз, развитию сердечно-сосудистых заболеваний — инфаркт миокарда, инсульт.
Если у человека диагностирован диабет 1 типа, ему потребуется инсулин для контроля уровня сахара в крови. Диабет 1 типа обычно развивается в детстве или юности, но может произойти в любое время. Это может также появиться быстро, через несколько недель.
Диабет 2 типа обычно появляется в более позднем возрасте и развивается годами. Диагноз преддиабета позволит человеку внести изменения в образ жизни, которые могут замедлить или обратить вспять прогрессирование состояния.
ADA рекомендует проводить скрининг на диабет 2 типа в возрасте от 45 лет или ранее, если у человека есть факторы риска, такие как ожирение.
Кетоны
Человек с сахарным диабетом, который обнаруживает кетоны в своей моче, должен обратиться к врачу, чтобы предотвратить усугубление проблемы.
Если уровень кетонов высок, им может потребоваться лечение в больнице с использованием препаратов инсулина, введения электролитов и жидкости.
Некоторые низкоуглеводные диеты могут привести к расщеплению жира и образованию кетонов для топлива. Низкоуглеводная диета сама по себе не вызывает кетоацидоз и отличается от ДКА.
Тем не менее, человек с диабетом должен обсудить свой план питания с врачом и проконсультироваться о любых изменениях питания, которые он желает внести.
Белки
Белок в моче может быть признаком заболевания почек.
Человек с диабетом должен поговорить со своим врачом, если он заметит следующие симптомы:
Люди с заболеванием почек часто не замечают никаких симптомов до более поздних стадий, когда почки перестают работать эффективно. Это может привести к серьезным осложнениям.
Врач может предложить регулярный скрининг белка в моче, поскольку это может помочь выявить проблемы с почками на ранних стадиях, в то время как еще есть время для принятия профилактических мер.
Люди имеют более высокий риск заболевания почек, если у них:
Решение проблемы высокого уровня глюкозы и артериального давления может снизить риск.
Резюме
Если человек обнаруживает кетоны в своей моче, ему следует обратиться к врачу за советом. Если врач обнаружит высокий уровень глюкозы, кетонов или белка в моче человека, он может назначить дальнейшие анализы.
В зависимости от результатов могут потребоваться дополнительные исследования.
Зачастую образ жизни, такой как здоровое питание и физические упражнения, являются ключом к снижению риска дальнейших осложнений. Тем не менее, врач может также назначить лечение или рекомендовать госпитализацию в некоторых случаях.
| Исследуемый биоматериал | Моча (разовая порция) |
| Cрок исполнения с момента поступления биоматериала в лабораторию | 1 к.д. |
Описание
За поддержание нормальной концентрации данного сахарида в крови отвечают контринсулярные гормоны и инсулин. Инсулин вырабатывается β-клетками поджелудочной железы, и его работа заключается в снижении концентрации глюкозы крови. При таких заболеваниях, как сахарный диабет, происходит дефект секреции инсулина, действия инсулина или обоих этих факторов. К контринсулярным гормонам относятся тиреотропный гормон, адреналин, кортизол, соматотропин. Действие этих гормонов противоположно действию инсулина. Они активируются в момент физического напряжения, стрессовых ситуаций и увеличивают концентрацию глюкозы в крови. При приеме некоторых лекарственных средств (ГКС, гормонов щитовидной железы) увеличивается концентрация контринсулярных гормонов.
Что определяет анализ мочи на глюкозу? Обнаружение глюкозы в моче является характерной чертой сахарного диабета. Данный анализ рекомендуется проводить одновременно с определением глюкозы в крови. Повышенный уровень сахара в моче (эпизодически) может выявляться у здоровых людей. Это связано с употреблением в пищу продуктов, богатых сахаром (например, мед или варенье)
Подготовка
Ищем педагогов в команду «Инфоурок»
Государственное автономное образовательное учреждение
среднего профессионального образования Республики Крым
«Евпаторийский медицинский колледж»
План занятия (практическое) № 5
Дисциплина (МДК) 01.01. Теория и практика лабораторных общеклинических исследований
Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика
Приобрести первоначальный практический опыт работы при проведении лабораторных общеклинических исследований
Отработать практические навыки и умения
Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов
Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;
Устанавливать причинно-следственные связи
продолжить формирование эволюционных представлений о развитии органического мира, передачи наследственного материала
воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям
продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения
продолжить формирования здорового образа жизни
Анатомия и физиология человека
Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ
Клинический анализ мочи
Место проведения: лаборатория 405
Тип занятия: практическое
Количество часов: 4 академических
Обеспечение занятия: стол лаборанта, оборудование для проведения всех этапов общеклинического исследования, реактивы посуда; мультимедийное оснащение, таблицы, схемы, алгоритмы.
Камышников В. С. «Методы клинических лабораторных исследований», «Мединформ», Москва, 2015г
Студент должен уметь:
Проводить работы с соблюдением правил работы в КДЛ, санитарно-противоэпидемиологического режима, техники безопасности.
Готовить биологический материал, реактивы, лабораторную посуду, оборудование;
4. Проводить общий анализ мочи: определять ее физические и химические свойства, исследовать под микроскопом осадок;
5. Проводить функциональные пробы;
6. Проводить дополнительные химические исследования мочи (определение пигментов мочи, кетоновых тел и прочее);
7. Проводить количественные исследования осадка мочи;
8. Работать на анализаторах мочи;
Студент должен знать:
задачи, структуру, оборудование, правила работы и технику безопасности в лаборатории клинических исследований;
основные методы и диагностическое значение исследований физических, химических показателей мочи;
морфологию клеточных и других элементов мочи;
Этапы обработки лабораторной посуды и критерии унификации
Студент должен обладать:
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
ПК 1.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.
ПК 1.3. Регистрировать полученные результаты лабораторных общеклинических исследований.
ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.
Организационный момент 2 мин.
Мотивация (цели) занятия 3 мин.
Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 15 мин.
Инструктаж самостоятельной работы студентов 15 мин.
Практическая часть 135 мин.
Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.
Задание на дом 2 мин.
(Приветствие, проверка присутствующих, внешнего вида студентов, сообщение темы, учебных целей занятия)
Инструктаж по охране труда ( роспись в журнале по технике безопасности )
Мотивация (цели) занятия :
Формирование общих и профессиональных компетенций, приобретение первоначального практического опыта работы по специальности в части освоение основного вида профессиональной деятельности.
Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) :
б) подведение итогов контроля:
Оценивание, замечания по работе.
а) подготовка студентов к самостоятельной работе ( проведение инструктажа по выполнению заданий):
В течении рабочего времени обучающиеся должны отработать навыки по подготовке лабораторной посуды к проведению исследований.
б) самостоятельная работа студентов: (алгоритмы выполняемых работ)
Промаркировать полученный биоматериал пробирки, направления и бланки анализов
Организовать рабочий стол лаборанта для проведения физического исследования мочи
Организовать рабочий стол для качественного определения глюкозы реакцией Гайнеса-Акимова, «глюкотестом»
Организовать рабочий стол для количественного определения глюкозы в моче ортотолуидиновым методом
Организовать рабочий стол для количественного определения глюкозы в моче глюкозооксидазным методом
Составить схему определения глюкозы методом ортотолуидиновым методом
Составить схему определения глюкозы глюкозооксидазным методом
в) подведение итогов самостоятельной работы
Записать в дневники выводы о проделанной работе
Проверка преподавателем работ студентов
Подведение итогов занятия, оценка работы студентов
Преподаватель высшей квалификационной категории, кандидат биологических наук Зейналиева Э. Н.
Алгоритм качественного определения глюкозы в моче Реакция Гайнеса-Акимова
Принцип. В основу большинства методов положены восстанавливающие свойства глюкозы. В реакции Гайнеса-Акимова восстанавливается сульфат меди последовательно в гидроксид меди желтого цвета и в оксид меди кирпично-красного цвета. Реакция протекает при нагревании в щелочной среде.
Реактив : (по прописи Акимова): 13,3 г химически чистого сульфата меди растворяют в 400 мл дистиллированной воды (раствор 1); в другой посуде растворяют 50 г гидроксида натрия в 400 мл дистиллированной воды (раствор 2); далее разводят 15 г глицерина в 200 мл дистиллированной воды (раствор 3). Смешивают растворы 1 и 2, и к этой смеси при постоянном помешивании прибавляют небольшими порциями раствор 3. Получают готовый реактив синего цвета. Он годен в течение длительного времени.
Ход определения : 1. В пробирку помещают 3 – 4 мл реактива Гайнеса- Акимова и 8 – 12 капель мочи, нагревают ее над пламенем до закипания смеси,
2. Затем кипятят в течение 1 – 2 мин или кипятят на водяной бане.
3. При наличии глюкозы голубой цвет переходит в желтый, а при отсутствии цвет реактива Гайнеса-Акимова не изменяется. 4. На практике чаще к 1 капле мочи прибавляют 9 капель реактива и кипятят на водяной бане 1 – 2 мин. 5. На результаты анализов могут влиять и другие редуцирующие вещества мочи (ацетилсалициловая кислота, ПАСК, кофеин, антибиотики, поливитамины, аскорбиновая кислота, хлорамин, желчные кислоты, билирубин), от которых необходимо избавляться.
Определение глюкозы с использованием методов «сухой» химии
Методология «сухой» химии реализуется с применением специальных полосок, реагентные зоны которых содержат сухие реактивы (ферменты и/или неферменты), способные воздействовать на определенные метаболиты биологических жидкостей с изменением окраски индикаторной зоны.
Для экспресс-выявления глюкозы в моче и ее полуколичественного определения используются тест-полоски ФАН чешской фирмы «Лахема»; «Уритест-1», «Уритест-2» фирмы «Кормэй»; «Глюкотест» фирмы «Рош-Диагностика» («Берингер-Мангейм») и др.
Реакция при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест»
Выпускается индикаторная бумага «Глюкотест» для полуколичественного определения глюкозы в моче. На этикетке упаковки обозначены условия хранения, срок годности, дата выпуска и др. Каждый комплект содержит 100 полосок индикаторной бумаги, пластмассовую пластинку белого цвета, цветную шкалу и инструкцию по проведению исследования. Индикаторная бумага имеет размер 0,5×5 см и поперечную полосу светло-желтого цвета. Эта полоса нанесена вблизи одного из краев бумаги и пропитана раствором ферментов и красителя.
При проведении качественной реакции на присутствие глюкозы в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест» рекомендуют выполнять следующие методические указания: исследовать свежесобранную мочу, полученную до приема пищи; индикаторную бумагу хранить в темном закрытом пенале при температуре 8°С; использовать индикаторную бумагу в течение оптимального срока годности (8 мес. со дня выпуска).
Количественное определение глюкозы
Унифицированые способы количественного определения глюкозы в моче по цветной реакции с ортотолуидином и глюкозооксидазный метод.
Количественное определение глюкозы производят только в тех порциях мочи, в которых она была обнаружена качественно. При определении глюкозы в суточном количестве мочи у больных сахарным диабетом исследуют три порции мочи, собранные через каждые 8 часов. Во избежание ложноположительных результатов перед определением глюкозы приостанавливают лечение тетрациклином, хлортетрациклином, так как они выделяются с мочой и искажают результаты определений.
Алгоритм Количественное определение глюкозы в моче ортотолуидиновым методом
Принцип. Глюкоза образует с ортотолуидином в кислой среде при нагревании зелено-синее окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации глюкозы.
Оборудование: штатив, пробирки, ФЭК Реактивы:
1. Раствор трихлоруксусной (ТХУ) кислоты (30 г/л): 3 гТХУ доводят дистиллированной водой до 100 мл.
2. Стабилизированный раствор ортотолуидина в ледяной уксусной кислоте (в 94 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,15 г тиомочевины и добавляют 6 мл ортотолуидина). Реактив стоек при хранении в холодильнике.
3. Стандартный раствор глюкозы: в мерную колбу на 100 мл вносят 50 мл раствора бензойной кислоты (2 г/л), прибавляют 500 мг высушенной до постоянной массы глюкозы; после полного растворения глюкозы доливают раствором бензойной кислоты (2 г/л) до метки. Концентрация глюкозы в приготовленном растворе равна 5 г/л (27,5 ммоль/л). Из стандартного раствора готовят рабочий раствор, содержащий 1 г/л (5,5 ммоль/л) глюкозы.
7.Раствор для контроля (достаточно одного раствора для целой серии определений). К 0,5 мл раствора ТХУ (30 г/л) добавляют 4,5 мл ортотолуидинового реактива. Смесь не центрифугируют, но обрабатывают так же, как и опытные пробы.
8. Стандартный раствор. К 0,1 мл стандартного раствора глюкозы (концентрация 1,0 г/л) добавляют 1,0 мл раствора ТХУ (30 г/л), перемешивают, отбирают 0,5 мл, добавляют 4,5 мл ортотолуидинового реактива и обрабатывают параллельно с опытной пробой.
9. Расчет ведут по формуле:
где Соп– концентрация глюкозы в пробе в ммоль/л; Сст– концентрация глюкозы в стандартном растворе в ммоль/л; Еоп– оптическая плотность опытной пробы; Ест– оптическая плотность стандартной пробы. Полученный результат умножают на степень разведения.
Пример: Еоп=0,6. Ест=0,3. Сст=5,5 ммоль/л. Соп=0,6:0,3×5,5= 11,0 ммоль/л.
Коэффициенты пересчета: % глюкозы в моче × 55,5 = ммоль/л; мг% глюкозы в моче × 0,0555 = ммоль/л.
Для определения глюкозы мочу собирают за 24 ч и измеряют ее объем. Определяют содержание глюкозы вышеописанным способом. Например, содержание глюкозы составляет 4,1 ммоль/л, суточный диурез 1,5 л., следовательно, в суточном количестве мочи концентрация глюкозы равна 4,1 ммоль/л × 1,5=6,15 ммоль/л.
Количественное определение глюкозы в моче глюкозооксидазным методом
Принцип. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода. Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта, определяемого фотометрически.
Оборудование: штатив, пробирки, пипетки, ФЭК
1. Буферный раствор, pH 6,0.
2. Реагент (смесь ферментов).
3. Стандарт глюкозы 5,55 ммоль/л.
4. Стандарт глюкозы 16,0 ммоль/л
1.Приготовление рабочего реагента: за несколько часов до проведения анализа (рекомендуется за сутки) содержимое флакона 2 растворяют буферным раствором из флакона 1 (до полного растворения реагента), количественно переносят во флакон 1 и перемешивают. Внимание! Рабочий реагент хранится в темном месте при температуре 2-8°С в течение месяца.
2. Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1:5 или 1:10, в зависимости от качественной реакции, результат умножают на коэффициент разведения.
3. Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 15 мин при 37°С на водяной бане или в термостате при предварительно прогретом рабочем реагенте. Измеряют оптическую плотность опытной пробы Апр и стандарта Аст против холостой пробы. Стабильность окраски – 15 мин.
4. Концентрацию глюкозы в моче С в ммоль/л определяют по формуле:
где Сст – концентрация одного из стандартов глюкозы, которому соответствует оптическая плотность Аст
5. Для определения глюкозы в суточной моче мочу собирают за 24 ч и измеряют ее объем. 6. Определяют содержание глюкозы вышеописанным способом. Например, содержание глюкозы составляет 3,2 ммоль/л, суточный диурез 1,3 л, следовательно, в суточном количестве мочи концентрация глюкозы равна 3,2 ммоль/л-1,3 = 4,16 ммоль/л.
Примечание: в настоящее время для определения глюкозы в моче используют сертифицированные коммерческие наборы реагентов.