Цоликлон
Цоликло́н — это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека. Моноклональные антитела для цоликлонов получают при помощи гибридов, или определенных штаммов бактерий. Бактерии для таких производств получают методами генной инженерии.
Название препаратов происходит от названия института, где изобрели и изготовили эти растворы — Центральный Ордена Ленина Институт переливания крови в Москве, сейчас — Гематологический научный центр Росздрава.
Содержание
Характеристика и основные свойства Цоликлонов Анти-А, Анти-В и Анти-АВ
Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М, Цоликпоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом, Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.
Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью цоликлонов
Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С. 1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ по одной большой капле (0.1 мл) под соответствующими надписями. 2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). 3. Смешайте кровь с реагентом, 4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. 5. Результат реакции а каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся В крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной а красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. 6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице:
Цоликлоны на практике применяются для определения групп крови. В настоящее время существует большое количество цоликлонов к разным антигенам, которые предназначены для определения групп крови по различным системам. Наиболее часто используются цоликлоны анти-А (красная жидкость), анти-B (синяя жидкость) и анти-D (прозрачная жидкость). Первые два цоликлона предназначены для определения группы крови по системе AB0, последний — для определения группы крови по системе резус. Кроме того, достаточно распространены в использовании цоликлон анти-А1 (лектин), позволяющий среди носителей А-антигена выбрать популяцию носителей ослабленного А2-антигена (то есть лиц, имеющих А2(II) или А2В(IV) группы крови). Неиспользовние цоликлона анти-А1 чревато неверным результатом для такой категории лиц. (вероятна постановка 0(I) вместо А2(II) и В(III) вместо А2В(IV) групп крови). Цоликлон анти-D имеет 2 модификации: собственно анти-D, используемый во врачебно-диагностической практике в комплексе с 10%-м желатином, и анти-D-супер, позволяющим произвести экспресс-определение резус-фактора (при этом все резус-отрицательные пробы требуют обязательной проверки цоликлоном анти-D, так как возможен вариант носительства ослабленного антигена системы резус.).
Форма выпуска
Цоликлоны выпускаются в жидкой форме в пластиковых флаконах объёмом 10 мл с капельницей или в стеклянных флаконах объёмом 5 мл. Цоликлон Анти-А — красного цвета, Анти-В — синего и Анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1 %.
Хранение
Срок хранения — 2 года при температуре 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8°С в течение месяца в закрытом виде.
Цоликлоны для определения группы крови
Определение группы крови по цоликлонам — это простая процедура, которая проводится в лабораторных условиях. В ее основе лежит химическая реакция между моноклональными сыворотками и агглютиногенами. В результате можно узнать не только группу крови, но и ее резус-фактор, и эти методики считаются наиболее простыми, точными и доступными. Вещества продаются в удобных флаконах разного объема и оснащены дозатором-капельницей. Проведение анализа занимает несколько минут, благодаря чему в лабораториях можно в течение дня обработать огромное количество проб.
Что такое цоликлоны?
Цоликоны — это моноклональные антитела, которые находятся в солевом растворе. Вещество получило свое название в честь его изобретателей — Центральный Ордена Ленина Институт, сегодня переименованный в Гематологический научный центр. Они представлены жидкостью, которая продается во флаконах объемом 5 и 10 мл. Это универсальный реагент для гематологических исследований, поскольку позволяет определить группу крови как в системе АВ0, так в системе резус.
Выделяют 3 основные разновидности цоликлонов:
Для определения группы крови применяются цоликлоны анти-А и анти-В. Они вступают в биохимические реакции с агглютиногенами, которые расположены на поверхности эритроцитов — красных кровяных клеток. Эритроциты группы крови А содержат агглютиноген А, который прореагирует с цоликлоном анти-А. Аналогично определяется содержание агглютингена В. Положительным результатом реакции считается склеивание эритроцитов и выпадение их в осадок.
Процедура определения группы крови
Процедура, как определить группу крови с помощью цоликлонов, очень проста и проводится за несколько минут. Для нее потребуется нативная («живая») капиллярная кровь, допускается наличие в ней консерванта. Также понадобится планшет — плоская поверхность из стекла, на которой будет происходить реакция. Процедуру проводят по определенному алгоритму:
Для установления группы подойдет и кровь с добавлением консерванта. Однако простота методики позволяет проводить ее на месте непосредственно после взятия биологического материала. Достаточно набрать небольшое количество капиллярной крови из пальца, чтобы ее полностью хватило для проведения анализа.
Расшифровка результатов
Спустя несколько минут после соединения реагентов можно наблюдать результаты. Полное смешивание жидкостей говорит об отсутствии реакции, а агглютинация проявляется появлением красных сгустков в прозрачном растворе. Это эритроциты, которые склеиваются между собой при контакте с несовместимыми моноклональными антителами. Далее можно расшифровать результаты по простому алгоритму:
Четвертая группа крови считается самой редкой, поэтому при появлении агглютинации в обеих лунках анализ проводится повторно. Кроме того, кровь необходимо добавить в обычный физиологический раствор, чтобы исключить вероятность опасных заболеваний. У здорового человека она никак не прореагирует с физраствором, а эритроциты не будут склеиваться.
Определение резус-фактора
Для определения резус-фактора понадобится цоликлон анти- D. Он представлен бесцветной жидкостью и также продается в небольших флаконах с дозатором. Чтобы провести реакцию, достаточно одной дополнительной капли крови, которую помещают на планшете отдельно. Процедура проводится по следующей схеме:
Первые результаты могут просматриваться через 15 секунд, но для установления окончательного результата важно подождать 3 минуты. Наличие результата, то есть появление реакции агглютинации, говорит о том, что резус-фактор положительный, его отсутствие свидетельствует об отрицательном резусе.
Полезные советы
Определение группы и резус-фактора крови с использованием цоликлонов считается одним из самых простых и доступных методов, поэтому широко применяется в лабораториях разного уровня. Кроме того, такой анализ дает достоверные результаты. Однако в некоторых случаях они бывают ложными, а причиной этому становится несоблюдение нескольких правил. Простая инструкция по применению цоликлонов и работа с ними позволит избежать получения недостоверных результатов и необходимости проводить исследование заново:
Важно также соблюдать последовательность действий во время анализа. Так, если стеклянную поверхность не раскачивать, даже при отсутствии реакции склеивания эритроциты будут расположены в краевой зоне капли. Это может стать причиной неправильной интерпретации результатов. При определении группы крови необходимо учитывать острые и хронические заболевания, которые наблюдаются у пациента. При патологиях печени и органов кроветворной системы, а также болезнях, которые протекают по типу сепсиса, может происходить явление патагглютинации. Эритроциты будут склеиваться даже при контакте с обычным физиологическим раствором. Напротив, при лейкозе кровяные клетки не отреагируют на присутствие антител, и агглютинация не произойдет.
Цоликлоны — это важные реагенты, которые используются ежедневно в гематологических лабораториях. Они позволяют быстро и безошибочно определить группу крови и ее резус без дополнительного оборудования и специальных навыков. Однако важно выполнять простой алгоритм, чтобы результаты анализа действительно были достоверными.
Цоликлоны
Цоликлоны для типирования по системе AB0
Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ, анти-А1 применяются с целью типирования группы крови человека по антигенам эритроцитов АВ0 в прямой реакции гемагглютинации. Реагент анти-A1 позволяет выявить варианты групповых антигенов А: А1, А2 и АВ: А1В, А2В.
Действующее начало анти-А, анти-В и анти-АВ – мышиные моноклональные антитела класса IgM. Основа цоликлона анти-А1 – мышиные моноклональные IgM-антитела или растительный лектин (фитогемагглютинин).
Специфичность
Моноклональные реагенты полностью моноспецифичны по иммунохимическим характеристикам и не вызывают неспецифической агглютинации.
Результаты AB0 типирования
(+) – наличие агглютинации;
(-) – отсутствие агглютинации;
– окончательное заключение о групповой принадлежности.
В случае наличия агглютинации анализируемых эритроцитов со всеми четырьмя реагентами (группа А1В) убедитесь в отсутствии спонтанной аутоагглютинации. Проведите дополнительное контрольное исследование образца с 0,9 % раствором NaCl.
На плоскости смешайте одну каплю (0,01 – 0,05 мл) крови с одной каплей (0,1 мл) NaCl. В случае отсутствия агглютинации отнесите кровь к группе А1В (IV). В случае появления спонтанной агглютинации повторите типирование с использованием отмытых эритроцитов данного образца.
Цоликлон анти-D Супер или анти-D IgM
В случае отсутствия агглютинации с анти-D IgM проводят уточняющее исследование образцов крови доноров с помощью Цоликлона анти-D IgG. Реагент выявляет наличие слабых антигенов или вариантов антигена D. Тест с анти-D IgG для реципиентов не проводят.
Действующее начало диагностикума – человеческие моноклональные IgM-антитела, продуцируемые гетерогибридомной линией клеток человек-мышь.
Специфичность анти-D IgM
Цоликлон анти-D IgG
Действующее начало диагностикума – человеческие моноклональные IgG-антитела. Продуцируются гетерогибридомной линией клеток человек-мышь.
Специфичность цоликлона анти-Д IgG
Определение группы крови
Определение группы крови – процедура, в ходе которой анализируют антигены – белки, входящие в состав эритроцитов, красных кровяных телец. Существует несколько разновидностей антигенов и вырабатываемых ими антител, исходя из чего каждого человека, в зависимости от состава его эритроцитов, можно причислить к определенной группе крови.
Вы можете пройти определение группы крови и резус-фактора в Поликлинике Отрадное. Срок готовности результатов анализа – от одного дня. Если у вас нет времени, чтобы приехать в клинику, сдать кровь для исследования вы можете и на дому: к вам выедет медсестра.
Наличие данных о собственной группе крови в критической ситуации, когда счет идет на минуты, может спасти человеку жизнь. Если такой информации нет, то врачам, перед переливанием крови придется дополнительно тратить время на исследование. Поэтому каждому пациенту рекомендуется сдать анализ на определение группы крови и всегда носить распечатку результатов исследования с собой: например, в кошельке, рядом с другими важными документами.
Определение группы крови и резус-фактора
Сейчас существует более 30 разных подходов к определению групп крови. В зависимости от используемой системы, количество групп крови может быть разным: системы Келл, Кид и Даффи выделяют 3, а MNSs – 9. И все же наиболее распространенными являются две системы:
Система AB0 выделяет 4 группы крови и подразумевает исследование 3 видов антигенов – A, B и H. Однако в результатах анализов H принято заменять на 0 (что говорит об отсутствии в эритроцитах антигенов A и B). Буквы дополняют цифрами – I, II, III или IV. Именно поэтому сами пациенты часто говорят о своей группе крови не в буквенном, а цифровом обозначении – первая, вторая, третья или четвертая. В ходе анализа учитывается не только присутствие/отсутствие в эритроцитах антигенов, но также и наличие в плазме крови агглютининов. Это специфические белки, антитела, атакующие «чужеродные» эритроциты. Если пациенту перелить кровь группы с не подходящими ему антигенами, агглютинины уничтожат содержащие их эритроциты.
По системе AB0 выделяют следующие группы крови:
Система Rh (резус-фактор) подразумевает анализ антигена D – специфического белка крови, присутствующего или отсутствующего на поверхности эритроцитов. Резус-фактор будет положительным (обозначается как Rh+) при наличии антигена. При отсутствии этого белка — он отрицателен (Rh-).
Резус-фактор имеет значение лишь в 2 ситуациях:
Определение группы крови обычно подразумевает применение обеих систем: ABO и Rh.
Показания к исследованию
Анализ на определение группы крови осуществляется:
При наличии у малыша положительного Rh для профилактики резус-конфликта во время последующей беременности женщине в первые трое суток после родов вводят антирезусный иммуноглобулин.
Важно! Резус-конфликт редко возникает при первой беременности, обычно – при последующих. Это объясняется тем, что иммунная система женщины сталкивается с «чужеродным» антигеном впервые, и не успевает дать сильный ответ, но «запоминает угрозу». В следующий раз она уже отреагирует гораздо агрессивнее. Однако определение группы крови и резус-фактора необходимо проводить и перед первой беременностью. Введение антирезусного препарата после первых родов позволит избежать осложнений последующих беременностей.
Экстренно определение группы крови требуется перед переливанием крови в следующих случаях:
Подготовка к исследованию
Специфических подготовительных мер не требуется. Однако принимать пищу рекомендуется не позднее чем за 4 часа до забора крови. Также накануне процедуры следует исключить чрезмерные физические нагрузки. Лучше прийти в клинику заблаговременно и до сдачи крови в течение 10-15 минут спокойно посидеть.
Так как на результаты исследования могут оказывать влияние некоторые заболевания, прием ряда лекарств, особенности питания и даже эмоциональное состояние пациента, анализ рекомендуется во избежание получения недостоверных результатов проводить два раза. Следует заранее предоставить врачу список всех принимаемых медикаментов.
Методы определения группы крови
В настоящее время существуют 3 основных метода определения группы крови, соответствующие системе AB0:
Кровь для исследования обычно берется из вены, иногда из пальца.
Стандартный метод
Определение группы крови по стандартным сывороткам – наиболее простой и распространенный метод. Используемые сыворотки соответствуют 4 группам крови и окрашены в разные цвета:
Справка. Изогемагглютинирующие сыворотки изготавливают из крови доноров. Они имеют срок годности и должны храниться при температуре 4-8 °С. Сыворотки выпускаются сериями, номер серии отмечают на ампуле. Для анализа берут по две сыворотки каждой группы из разных серий. Это позволяет исключить ошибку в результатах исследования.
Определение группы крови – алгоритм:
Метод перекрестной реакции
Исследование подразумевает проведение двух анализов: со стандартными сыворотками и со стандартными эритроцитами. Для процедуры с эритроцитами используется сыворотка крови пациента. Ее получают путем центрифугирования биоматериала. Сыворотку подвергают воздействию стандартных эритроцитов.
Справка. Стандартные эритроциты получают из донорской крови групп 0, A и B. Для анализа берется по 2 образца одних и тех же эритроцитов из разных серий.
На тарелку наносят капли сыворотки крови пациента, а рядом с ними – капли стандартных эритроцитов. Тарелку покачивают, чтобы материалы смешались. Затем оценивают результаты:
Параллельно с этим исследованием проводят анализ стандартным методом, а затем сравнивают результаты.
Определение группы крови цоликлонами
Определение группы крови с помощью цоликлонов проводится точно так же, как по стандартному методу. Результаты оцениваются тем же образом. Разница лишь в том, что вместо стандартных сывороток применяют цоликлоны анти-А и анти-B – это синтетические сыворотки, содержащие искусственные агглютинины α и β.
Определение резус-фактора
Резус-фактор может определяться с помощью:
Для исследования с помощью стандартной антирезусной сыворотки могут использовать кровь пациента или эритроциты, полученные из нее. В пробирку капают стандартную антирезусную сыворотку, затем вводят каплю крови пациента или эритроциты. Пробирку вращают в руках, чтобы кровь смешалась с сывороткой. В пробирку также добавляют немного физраствора. Результаты оцениваются по наличию/отсутствию агглютинации:
Анализ с помощью цоликлона анти-D супер проводится на тарелке. На нее наносят реагент, рядом располагают каплю крови. Тарелку покачивают, чтобы материалы соединились. Затем, как и в предыдущем методе, оценивают наличие или отсутствие реакции агглютинации.
Резус-фактор: отрицательный и положительный
Около 85% всех жителей планеты обладают положительным резус-фактором. Наличие или отсутствие антигена D не сказывается на самочувствии и здоровье пациента.
Правила расшифровки результатов
Результаты анализа выдаются пациенту в следующей форме:
Результаты анализа на определение группы крови будут актуальными на протяжении всей жизни. Если исследование уже было проведено, повторять его заново не требуется. Группа крови – «постоянная величина» и генетически наследуемый признак, то есть не изменяется в течение жизни. Хотя однажды у юной австралийки Деми Ли-Бреннан поменялась группа крови после пересадки печени. Но данный случай является исключением, и доктора так и не смогли однозначно объяснить этот феномен.
Иногда некоторые пациенты утверждают, что вследствие какого-то заболевания или во время беременности у них изменилась группа крови. Это можно объяснить врачебной ошибкой. И беременность, и некоторые патологии способны затруднять расшифровку результатов анализов, вследствие чего они могут получиться недостоверными. Бывают случаи, что ошибка была допущена при предыдущем исследовании крови.
Цоликлоны что это такое
Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови человека системы АВО взамен стандартных изогем-агглютинирующих сывороток.
Определение групп крови системы АВО включает выявление антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами и выявление агглютининов в сыворотке или плазме исследуемой крови стандартными эритроцитами. Антигены А и В определяют с помощью цоликлонов анти-А и анти-В. У доноров обязательно определение не только антигенов в эритроцитах, но и агглютининов в сыворотке (плазме) с помощью стандартных эритроцитов.
Основные свойства цоликлональных сывороток.
Цоликлоны анти-А и анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридомные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, которые полностью идентичны по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.
Справка. Клональные антитела.
Культура клеток одной специфичности, происходящих из одного лимфоцита, образует клетки одного клона. Главное заключается в следующем: необходимо получить от одной клетки специфические антитела и наработать их в неограниченном количестве. Трудность заключается в преодолении двух задач: во-первых, нормальные клетки после нескольких делений погибают; во-вторых, только раковые клетки способны неограниченно размножаться. Для решения этих двух несовместимых проблем в 1975 году Г. Кёлер и К. Мильштейн создали клеточные гибриды, или гибридомы. Гибридомы — это слияние нормальных лимфоцитов в питательной среде с клетками миеломы. Лимфоциты в этой среде не погибают, а от миеломного партнера получают возможность бесконечно размножаться. Таким образом, гибридомный клан размножается, а в результате этого процесса образуются моноклональные антитела.
Лимфоциты, несущие агтлютиноген А, вырабатывают специфическое антитело анти-А; лимфоциты, несущие агтлютиноген В, вырабатывают специфическое антитело анти-В.
Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса М (IgM), направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.
Таким образом, цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов.
Авидность, то есть время наступления реакции агглютинации и ее выраженность, у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВО-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов.
Цоликлоны не являются клетками человеческих тканей, что исключает возможность инфекционного заражения.
Методика определения групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В
Определение групп крови системы АВО реагентами цоликлон производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца; в крови, взятой без консерванта. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.
Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15° до +25°С. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную (анти-А или анти-В) пипетку. Определение группы крови системы АВО производится обычными методами на белой фарфоровой или любой другой планшетке со смачиваемой поверхностью.
Высокая активность и авидность реагентов цоликлон позволяет применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. На плоскость планшета или тарелку наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо брать большое количество эритроцитов, т. е. первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови.
При определении группы крови антитела и кровь смешивают стеклянной палочкой или углом предметного стекла, которые промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли. Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При этом агглютинаты можно увидеть без каких-либо приспособлений в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья.
При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация, обычно, определяется в течении первых 3—5 секунд. Несмотря на это, наблюдение за результатами необходимо вести не меньше 2,5 минуты из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
