Рестриктаза hpal какие концы образует
Эндонуклеаза рестрикции HpaI – фермент, катализирующий гидролиз двухцепочечной ДНК внутри специфического сайта рестрикции.
Time-Saver™ статус: Нет
Поставляется в комплекте с:
| Название компонента | Концентрация | Температура хранения |
| NEB-буфер CutSmart ® | 10X | -20°C |
| Краситель для нанесения на гель, пурпурный | 6X | 25°C |
Происхождение фермента: штамм E.coli, несущий ген HpaI Haemophilus parainfluenzae (ATCC 49669).
Одна единица активности (е.а.): количество фермента, необходимое для расщепления 1 мкг ДНК бактериофага лямбда за 1 час при температуре 37°С в реакционной смеси объемом 50 мкл.
Буфер для разведения: NEB A
Чувствительность к метилированию: блокируется при перекрывании некоторых сайтов CpG метилирования и рестрикции
Инактивация: не инактивируется нагреванием
Рестриктазы — это особые ферменты, способные разрезать цепочки ДНК в строго определенных местах. Именно в специфичности действия заключается главное отличие данной группы белков от других видов эндонуклеаз. Благодаря этому уникальному свойству ферменты рестрикции нашли широкое применение в генной инженерии.
Рестриктазы — это уникальные ферменты бактерий. Впервые эти белки были выделены в 1968 году из штаммов Esherihia colli. Дальнейшие исследования выявили присутствие эндонуклеаз рестрикции в одноклеточной водоросли Chlorella, а также в нескольких культурах дрожжей Sachoromyces и Pichia. В клетках других эукариотов рестриктазы пока не обнаружены.
Общая характеристика
Рестриктазы — ферменты, относящиеся к группе гидролаз, поскольку катализируют гидролиз фосфодиэфирной связи между нуклеотидами в цепочке ДНК. Место, в котором происходит разрезание, называется сайтом рестрикции. Последний может находиться как внутри опознаваемой последовательности, так и на расстоянии от нее.
Специфичный для рестриктазы участок распознавания обычно состоит из 4-8 нуклеотидов. Так как азотистые основания обращены внутрь двойной спирали, фермент находит нужную последовательность за счет взаимодействия с большой бороздкой ДНК.
Каждая рестриктаза имеет свой сайт распознавания и может функционировать только после связывания с ним.
Биологическая роль
Бактерии рестриктазы — это важнейший инструмент защиты клетки от бактериофагов. Основная задача ферментов данной группы состоит в разрезании проникшего в клетку чужеродного генетического материала. Фрагментирование нуклеиновой кислоты препятствует ее репликации, а значит, и размножению вируса.
Последовательности, к которым специфичны рестриктазы, с определенной периодичностью встречаются в геноме самой бактерии и потому подвергаются метилированию, которое не позволяет рестриктазам распознать свои мишени. Этот процесс осуществляется ферментами метилазами.
Механизм, направленный на разрезание чужеродной ДНК и защищающий от нуклеазной активности собственную, называется системой рестрикции-модификации. Некоторые типы рестриктаз способны проявлять как эндонуклеазную, так и метилазную активность.
На настоящий момент известно более 1000 бактериальных рестриктаз. Очень часто они рассматриваются не как отдельные ферменты, а в комплексе систем рестрикции-модификации.
Особенности действия рестриктаз
После связывания с последовательностью распознавания эндонуклеаза рестрикции поочередно расщепляются цепи ДНК. При этом могут образовываться два варианта концов:
Классификация рестриктаз
По строению и механизму действия все рестриктазы разделяют на 2 класса. К первому относятся ферменты, обладающие исключительно рестрикционной активностью, а метилирование осуществляется другим белком с аналогичной субстратной специфичностью.
Рестриктазы класса II представляют собой мультиферментные комплексы, способные как разрезать, так и модифицировать ДНК. Эти белки состоят из 3 функциональных субъединиц:
Есть и другая разновидность рестриктаз того же класса, для которой характерна структура из двух субъединиц. Такие ферменты называют бифункциональными.
Метилазная и эндонуклеазная активности у разных рестриктаз могут осуществляться одновременно, либо исключать друг друга. Эффект действия таких ферментов зависит от условий реакции.
В пределах двух классов выделят три типа рестиктаз (I, II и III), которые различаются по следующим характеристикам:
Тип II соответствует первому классу эндонуклеаз рестрикции, а первый и третий типы являются разновидностями класса II.
Адо-мет (необязателен, стимулирует реакцию)
Mg 2+ и АТФ (стимулируют реакцию)
Mg 2+ и АТФ (стимулируют реакцию)
Кроме трех основных разновидностей рестриктаз выделяют еще два типа:
Рестриктазы первого и третьего типов характеризуются неполным гидролизом цепей ДНК и потому практически не используются в технологиях генной инженерии.
Номенклатура
Обычно в названии рестриктазы содержится информация о том, из какого микроорганизма она была выделена. При этом, информация указывается в следующем порядке:
Иногда в название включают информацию о локализации генов, кодирующих рестриктазу.
Номенклатура для рестрикционных ферментов была разработана Смиттом и Натансом. Она базируется на следующих принципах:
Таким образом, вторая по счету рестриктаза, выделенная из штамма d бактерии Haemophilus influenzae будет обозначаться HindII.
Изошизомеры
Существует еще одна классификация ферментов рестрикции, основывающаяся на их специфичности к субстрату.
Изошизомеры — это рестриктазы с разным происхождением, но одинаковой субстратной специфичностью. Такие рестриктазы могут быть выделены даже из отдаленных таксонов бактерий. Открытие изошизомеров опровергло предположение о строгой таксоноспецифичности рестриктаз, утверждавшее, что участки распознавания для этих ферментов у разных видов микроорганизмов уникальны.
Неошизомеры
Неошизомерами называются рестриктазы, имеющие общий участок распознавания, но разные сайты рестрикции. Например, для ферментов SmaI и XmaI специфична последовательность CCCGGG, но в одном случае разрезание проходит посередине (CCC/GGG), а в другом расщепляется связь между первым и вторым нуклеотидами (C/CCGGG).
Изокаудомеры
К изокаудомерам относят ферменты рестрикции с разной субстратной специфичностью, которые формируют одинаковые концы. Предполагается, что белки данной группы не являются родственными.
Применение рестриктаз
Рестриктазы являются одним из главных молекулярных инструментов, используемых в технологии рекомбинантных ДНК. Благодаря этим ферментам стало возможным вырезать из геномов различных организмов определенные фрагменты или гены, а затем сшивать их с помощью лигаз.
Особенно удобно использование в генной инженерии рестриктаз, образующих одинаковые липкие концы. Такие фрагменты ДНК легко соединяются по принципу комплементарности
Рестриктаза HpaI (FastDigest KspAI)
Описание
Фермент рестрикции FastDigest KspAI от Thermo Scientific распознает сайт GTT ^ AAC и лучше всего режет при 37 ° C в течение 5–15 минут с использованием универсального буфера FastDigest.
Изошизомеры: HpaI, BsaKI, BseII, BstEZ359I, BstHPI, MwhI, SsrI, Uba1408II.
Отзывы
Добавьте отзыв:
Доставка и оплата
ООО “Пущинские Лаборатории” осуществляет доставку любого из представленных на сайте товаров, а так же товаров из каталогов фирм-производителей отображенных на нашем сайте.
По Москве доставка осуществляется собственной курьерьской службой
В любой город России транспортными компаниями Major Express, «Деловые линии»
Возможен самовывоз товара из нашего офиса, находящегося по адресу: МО, г. Пущино, ул. Строителей, д 3
Схема проезда
Доставка до терминала ТК «Деловые линии» в городе Серпухов бесплатно
Гарантии
Продукция, поставляемая компанией Пущинские Лаборатории, отвечает заявленным техническим характеристикам, транспортируется согласно условиям, рекомендованных производителями. По требованию клиента на все реактивы предоставляется сертификат анализа (на бумажном носителе или в электронном виде).
На оборудование, поставляемое компанией Пущинские Лаборатории, распространяется гарантийное и пост гарантийное обслуживание, согласно гарантийному талону и условиям производителя. В случае необходимости, в комплекте с прибором предоставляются регистрационное удостоверение и сертификат соответствия (при его наличие на данный товар).
Получить консультацию Вы можете по телефону 8 (499) 110-03-07 или отправьте запрос на info@laboratorii.com.
Оплата
Компания «Пущиские лаборатории» работает с физическими и юридическими лицами.
Физическое лицо (частный покупатель) может приобрести у нас товар:
Юридическое лицо может приобрести у нас товар товар:
Рестриктаза hpal какие концы образует
Благодаря методам молекулярной биологии можно исследовать структуру ДНК и генов. Эта наука прочно вошла практически во все области клинической медицины. Знание методов, которые применяют для оценки функции и структуры генов, совершенно необходимо для понимания молекулярных основ различных заболеваний.
ДНК представляет собой двойную спираль, образованную двумя нитями нуклеотидов, соединенных азотистыми основаниями. Ген представлен нитью ДНК, на основе которой в ядре клетки синтезируется (транскрибируется) мРНК. Этот процесс происходит в ядре клетки. На основе РНК затем образуется белок на рибосомах.
Аминокислотная последовательность белков определяется последовательностью нуклеотидов в ДНК, называемых кодонами. Система кодирования аминокислотной последовательности нуклеотидами называется генетическим кодом. Гены составляют лишь малый процент от 3 х 10 9 пар нуклеотидов, образующих гаплоидный геном человека.
Функция остальной ДНК остается не до конца изученной, но может проясниться после полного завершения проекта «Геном человека». Описание 50 000—100 000 генов человека поможет в понимании и лечении генетических заболеваний. В настоящее время уже завершено большинство проектов по определению локализации генов. Эта работа началась в 1989 г. Дополнительную информацию принесет обновление этих данных и сравнение их с результатами, полученными у животных.
ДНК человека огромна, а отдельные гены достаточно малы. Поэтому разделение ДНК на небольшие отрезки значительно облегчает исследование. Некоторые микроорганизмы синтезируют ферменты, называемые рестриктазами или рестрикционными эндонуклеазами; с их помощью возможно расщепление ДНК на небольшие части. В природе такие ферменты защищают микроорганизмы от чужеродной ДНК, например, вирусов.
Рестриктазы распознают специфические последовательности ДНК, в которых и расщепляют ее; эти ферменты называют в зависимости от вида и штамма микроорганизма, из которого их выделили. Например, EcoRI выделена из кишечной палочки Escherichia coli, штамм R, и служит первым подобным ферментом, полученным от данного микроба. Эта рестриктаза распознает последовательность GAATTC и расщепляет молекулу между основаниями G и А.
Рестриктазы (эндонуклеазы) распознают определенные последовательности оснований в молекуле ДНК и расщепляют их.
EcoRI распознает последовательность GATTC и расщепляет молекулу между основаниями G и А.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Рестриктаза
Эндонуклеазы рестрикции (или рестриктазы, лат. restrictio — ограничение) — группа ферментов, относящихся к классу гидролаз, катализируют реакцию гидролиза нуклеиновых кислот.
В отличие от экзонуклеаз, рестриктазы расщепляют нуклеиновые кислоты не с конца молекулы, а в середине. При этом каждая рестриктаза узнаёт определённый участок ДНК длиной от четырёх пар нуклеотидов и расщепляет нуклеотидную цепь внутри участка узнавания или вне его.
Содержание
Классификация
Выделают три класса эндонуклеаз рестрикции. К первому классу принадлежат ферменты (например, ЕсоК из Escherichia coli К12), узнающие специфическую последовательность сайта, но разрывающие нить ДНК в произвольной точке (по-видимому, после образования комплекса с ДНК фермент неспецифически взаимодействует с удаленной областью ДНК или передвигается вдоль нити ДНК). Ко второму классу принадлежат ферменты (например, EcoRI), расщепляющие ДНК в строго определенной точке по отношению к сайту узнавания. К третьему классу относят ферменты промежуточного типа (напр., EcoPI), разрывающие нить ДНК в нескольких точках на разном удалении от сайта узнавания. При этом образуются фрагменты ДНК либо с ровными (тупыми) концами, либо с выступающими (липкими) 5′- или З’-концами
Значение
Рестриктазы — часть сложной системы рестрикции-модификации, используемой бактериальными клетками для регуляции содержания и активности ДНК в клетке.
Открытие рестриктаз в 1970-х годах вместе с разработкой способов секвенирования ДНК послужило основным толчком для развития генетической инженерии.
Изошизомеры
Изошизомеры — это пары эндонуклеаз рестрикции, имеющих специфичность к распознаванию одинаковых последовательностей, но иногда отличающихся по наличию метилированных нуклеотидных остатков, и разрезающих эти последовательности в одинаковых местах. Например, изошизомерами являются рестриктазы Sph I (CGTAC^G) и Bbu I (CGTAC^G). Первый выделенный фермент для узнавания и специфического разрезания заданной последовательности, называют прототипом, а все остальные подобные рестриктазы называют изошизомерами.
Изошизомеры выделяют из разных штаммов бактерий и поэтому разные изошизомеры могут требовать разных условий реакции.
Гетерошизомеры (неошизомеры)
Фермент, узнающий такую же последовательность, но разрезающий ее по-другому, называют гетерошизомером (неошизомером). Изошизомеры, таким образом, являются частным случаем гетерошизомеров. Например, рестриктазы Sma I (GGG^CCC) и Xma I (G^GGCCC) являются гетерошизомерами, но не изошизомерами друг для друга.
Изокаудомеры
Рестриктазы, разпознающие совершенно разные последовательности, но образующие одинаковые концы, называют изокаудомерами.
См. также
Полезное
Смотреть что такое «Рестриктаза» в других словарях:
рестриктаза — сущ., кол во синонимов: 3 • нуклеаза (2) • рестрикция (3) • фермент (253) Слова … Словарь синонимов
рестриктаза — рестриктаза. См. рестрикционная эндонуклеаза. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.
рестриктаза — рестрикционная эндонуклеаза Бактериальный фермент, расщепляющий молекулу ДНК в строго специфичных сайтах; при этом Р., действующие на одинаковые последовательности нуклеотидов, называются изошизомерами, активность изошизомеров часто зависит от… … Справочник технического переводчика
рестриктаза — restriktazė statusas T sritis chemija apibrėžtis Fermentas, specifiškai skaidantis DNR. atitikmenys: angl. restrictase; restriction endonuclease rus. рестриктаза … Chemijos terminų aiškinamasis žodynas
Нуклеаза — Нуклеазы большая группа ферментов, гидролизующих фосфодиэфирную связь между субъединицами нуклеиновых кислот. Различают несколько типов нуклеаз в зависимости от их специфичности: экзонуклеазы и эндонуклеазы, рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы,… … Википедия
Нуклеазы — большая группа ферментов, гидролизующих фосфодиэфирную связь между субъединицами нуклеиновых кислот. Различают несколько типов нуклеаз в зависимости от их специфичности: экзонуклеазы и эндонуклеазы, рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, рестриктазы … Википедия
нуклеаза — рестриктаза Словарь русских синонимов. нуклеаза сущ., кол во синонимов: 2 • рестриктаза (3) • … Словарь синонимов
рестрикция — ограничение, рестриктаза Словарь русских синонимов. рестрикция сущ., кол во синонимов: 3 • ограничение (22) • … Словарь синонимов
Генетическая инженерия — I Генетическая инженерия направление исследований в молекулярной биологии и генетике, конечной целью которых является получение с помощью лабораторных приемов организмов с новыми, в т.ч. не встречающимися в природе, комбинациями наследственных… … Медицинская энциклопедия
