Fish отрицательный что значит
Флуоресцентная гибридизация in situ.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется.
Общая информация об исследовании
HER2-положительный статус опухоли выявляется у 25-30 % всех пациентов с РМЖ (около 15 тыс. новых случаев в год). В России около 90 000 тыс. женщин с РМЖ с положительным HER2-статусом. Из них выявлено и состоит на учете только 3 425 пациенток.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH, от англ. fluorescencein—situ hybridization) – это один из самых современных методов диагностики хромосомных аномалий. Он основан на использовании ДНК-проб, меченных флуоресцентной меткой. ДНК-пробы представляют собой специально синтезированные фрагменты ДНК, последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. Таким образом, ДНК-пробы различаются по составу: для определения разных хромосомных аномалий используются разные, специфические ДНК-пробы. ДНК-пробы также различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу.
В ходе процесса гибридизации при наличии в исследуемом образце аберрантных хромосом происходит их связывание с ДНК-пробой, которое при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как флуоресцентный сигнал (положительный результат FISH-теста). При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-пробы в ходе реакции отмываются, что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это не только качественный, но и количественный метод.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Результат оценивается как соотношение числа копий гена HER2 к числу копий 17 хромосомы.
FISH-положительным считается образец, в котором соотношение HER2:CEP17 больше или равно 2.0
15 Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 1 антитела)
15 Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 4 и более антител)
54 Определение HER2 статуса опухоли методом СISH
Кто назначает исследование?
Онколог, педиатр, акушер-гинеколог, врач-генетик.
Fish отрицательный что значит
Современный метод цитогенетического анализа, позволяющий определять качественные и количественные изменения хромосом (в том числе транслокации и микроделеции) и используемый для дифференциальной диагностики злокачественных заболеваний крови и солидных опухолей.
Флуоресцентная гибридизация in situ
Fluorescence in-situ hybridization
Флуоресцентная гибридизация in situ.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Подготовки не требуется.
Общая информация об исследовании
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH, от англ. fluorescence in—situ hybridization) – это один из самых современных методов диагностики хромосомных аномалий. Он основан на использовании ДНК-проб, меченных флуоресцентной меткой. ДНК-пробы представляют собой специально синтезированные фрагменты ДНК, последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. Таким образом, ДНК-пробы различаются по составу: для определения разных хромосомных аномалий используются разные, специфические ДНК-пробы. ДНК-пробы также различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу.
В ходе процесса гибридизации при наличии в исследуемом образце аберрантных хромосом происходит их связывание с ДНК-пробой, которое при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как флуоресцентный сигнал (положительный результат FISH-теста). При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-пробы в ходе реакции «отмываются», что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это не только качественный, но и количественный метод.
FISH-тест обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами цитогенетики. В первую очередь, исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам. Это основное преимущество FISH по сравнению с классическими способами кариотипирования (например, окрашиванием хромосом по Романовскому-Гимзе), которые применяются только к метафазным ядрам. Благодаря этому исследование FISH является более точным методом для определения хромосомных аномалий в тканях с низкой пролиферативной активностью, в том числе в солидных опухолях.
Так как в FISH-тесте используется стабильная ДНК интерфазных ядер, для исследования могут быть использованы самые различные биоматериалы – аспираты тонкоугольной аспирационной биопсии, мазки, аспираты костного мозга, биоптаты и, что немаловажно, сохраненные фрагменты ткани, например гистологические блоки. Так, например, FISH-тест может быть с успехом выполнен на повторных препаратах, полученных из гистологического блока биоптата молочной железы при подтверждении диагноза «аденокарцинома молочной железы» и необходимости определения HER2/neu-статуса опухоли. Следует особо подчеркнуть, что в данный момент исследование FISH рекомендовано в качестве подтверждающего теста при получении неопределенного результата иммуногистохимического исследования опухоли на онкомаркер HER2/neu(ИГХ 2+).
Другим преимуществом FISH является его способность определять микроделеции, которые не выявляются с помощью классического кариотипирования или ПЦР. Это имеет особое значение при подозрении на синдром Ди Джорджи и велокардиофациальный синдром.
FISH-тест широко используется в дифференциальной диагностике злокачественных заболеваний, в первую очередь в онкогематологии. Хромосомные аномалии в сочетании с клинической картиной и данными иммуногистохимического исследования являются основой классификации, определения тактики лечения и прогноза лимфо- и миелопролиферативнх заболеваний. Классическими примерами являются хронический миелолейкоз – t (9;22), острый промиелоцитарный лейкоз – t (15;17), хронический лимфолейкоз – трисомия 12 и другие. Что касается солидных опухолей, наиболее часто FISH-исследование применяется при диагностике рака молочной железы, мочевого пузыря, толстой кишки, нейробластомы, ретинобластомы и других.
Исследование FISH также может быть использовано в пренатальной и преимплантационной диагностике.
FISH-тест часто проводят в сочетании с другими методами молекулярной и цитогенетической диагностики. Результат этого исследования оценивают в комплексе с результатами дополнительных лабораторных и инструментальных данных.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Что может влиять на результат?
Кто назначает исследование?
Онколог, педиатр, акушер-гинеколог, врач-генетик.
Определение HER2 статуса опухоли методом FISH
Описание
Определение HER-2 статуса опухоли методом FISH — исследование предрасположенности к развитию опухоли и подбор своевременного адекватного лечения при раке молочной железы (РМЖ) или раке желудка (РЖ).
HER-2 (HER-2/neu) — human epidermal growth factor receptor-2 — это белок, который может влиять на рост раковых клеток. Он создается специальным геном, который называется ген HER-2/neu. HER-2 является рецептором для определённого фактора роста, который называется человеческим эпидермальным фактором роста, естественным образом существующим у человека. Когда человеческий эпидермальный фактор роста прикрепляется к рецепторам HER-2 на раковых клетках груди, он может стимулировать рост и деление этих клеток. В здоровой ткани HER-2 передаёт сигналы, регулирующие пролиферацию и выживаемость клеток, но гиперэкспрессия HER-2 может обусловить злокачественную трансформацию клеток.
Гиперэкспрессия HER-2 при некоторых подтипах РМЖ ведёт к усилению пролиферации и ангиогенеза, нарушению регуляции апоптоза (генетически запрограммированного самоуничтожения клеток). Показано, что при раке молочной железы гиперэкспрессия этого рецептора в ткани опухоли ассоциирована с более агрессивным течением болезни, повышенным метастатическим потенциалом опухоли и менее благоприятным прогнозом. Открытие связи гиперэкспрессии HER-2 с неблагоприятным прогнозом РМЖ привело к поиску таких подходов к лечению, которые направлены на специфическое блокирование онкогена HER-2/neu (таргетная анти-HER2-терапия).
Рак молочной железы (РМЖ) — злокачественная опухоль железистой ткани молочной железы. РЖМ занимает первое место среди всех злокачественных заболеваний у женщин.
В зависимости от наличия биологических маркёров опухоли — экспрессии гормональных рецепторов (эстрогена и/или прогестерона), экспрессии HER-2 — выделяют гормон-рецептор-положительный, HER-2-положительный и тройной негативный РМЖ.
HER-2/neu-положительные (HER-2+) типы рака молочной железы отличаются высокой экспрессией белка HER-2/neu.
HER=2/neu-негативные (HER-2-) типы рака молочной железы отличаются низкой экспрессией или отсутствием белка HER-2/neu.
Считается, что у одной из пяти женщин с раком груди опухоль является HER-2-положительной. Большинство раковых опухолей молочной железы являются гормонально-зависимыми: эстрогены и прогестерон оказывают на них стимулирующий эффект (пролиферативный и неопластический). При HER-2-положительном раке молочной железы на поверхности опухолевых клеток присутствует избыток HER-2-рецепторов. Данное явление носит название «положительный HER-2-статус» и диагностируется у 15–20% женщин, страдающих РМЖ.
HER-2 — рецептор эпидермального фактора роста человека 2-го типа, который присутствует в тканях и в норме, участвуя в регуляции деления и дифференцировки клеток. Его избыток на поверхности опухолевых клеток (гиперэкспрессия) предопределяет быстрый неконтролируемый рост новообразования, высокий риск метастазирования, низкую эффективность некоторых видов лечения. HER-2-положительный РМЖ является особенно агрессивной формой данного заболевания, поэтому точное определение HER-2-статуса имеет ключевое значение для выбора тактики лечения.
Рак желудка (РЖ) — злокачественная опухоль, происходящая из эпителия слизистой оболочки желудка.
РЖ занимает 4-е место в структуре онкологической заболеваемости и 2-е место в структуре онкологической смертности в мире. Заболеваемость РЖ у мужчин в 2 раза выше, чем у женщин. Россия относится к регионам с высоким уровнем заболеваемости РЖ и смертности от данного заболевания. Диагностика РЖ на ранних стадиях затруднена из-за длительного бессимптомного течения заболевания. Часто РЖ выявляют на поздних стадиях, когда 5-летняя выживаемость не превышает 5–10%, а единственным методом лечения остаётся химиотерапия.
Основным методом лечения РЖ является хирургический. Однако у большинства пациентов на момент постановки диагноза определяется распространённый опухолевый процесс, что делает невозможным выполнение радикальной операции и требует проведения системной лекарственной терапии. Проведение химиотерапии статистически достоверно увеличивает общую выживаемость больных метастатическим РЖ, улучшая качество их жизни.
Онкоген HER-2 (erbB-2) был первоначально идентифицирован в опухолях молочной железы. Амплификация и гиперэкспрессия данного гена является относительно специфическим событием для карцином молочной железы и практически не встречается в опухолях других локализаций. Рак желудка представляется одним из немногих исключений: активация HER-2 отмечается примерно в 10–15% злокачественных новообразований этого органа и коррелирует с агрессивным течением заболевания.
Гиперэкспрессия HER-2 является фактором неблагоприятного прогноза. По данным разных исследований, амплификация гена HER-2 у больных РЖ коррелирует с низкими показателями общей выживаемости.
Для оценки HER-2-статуса при РЖ и РМЖ используют FISH метод.
FISH — исследования позволяет определять качественные и количественные изменения хромосом для диагностики злокачественных заболеваний крови и солидных опухолей.
Сегодня во всём мире широко применяются исследования методом FISH.
Метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ) — изучение числа HER-2/neu-генов внутри раковых клеток.
Необходимы гистологический протокол и иммуногистохимический протокол, стекло ИГХ.
Рак груди и HER 2
Прежде чем приступить к лекарственному лечению рака молочной железы, необходимо составить так называемый «биологический портрет опухоли». В этот комплекс входит определение рецепторного статуса опухоли, индекса пролиферативной активности ki-67 и статус HER 2.
Определение HER 2 статуса опухоли и FISH-тест
Дальше следует анализ опухоли на амплификацию гена. Он называется методом внутриклеточной флуоресцентной гибридизации или аббревиатурой FISH от английского fluorescence in situ hybridization. При FISH-тесте «рассматривают» в ядре опухолевой клетки саму ДНК, в которой флуоресцентные метки соединились с геном HER2. Светящиеся метки контактируют со всеми копиями гена, во флуоресцентный микроскоп видно, что копий гена больше, чем необходимо. Тест FISH выдаёт такие варианты ответа:
Механизм работы трастузумаба понятен не до конца. Предполагают, что он активирует Т-лимфоциты, поэтому при большом количестве Т-лимфоцитов в опухоли, трастузумаб не работает. Большое число Т-лимфоцитов, собравшихся вокруг клеток опухоли, как бы сигнализируют ему: «Место уже занято, борьба с опухолью идёт, больше тут делать нечего». А вот когда Т-лимфоциты не населяют опухоль, трастузумаб оказывается полезным.
В конечном итоге трастузумаб каким-то образом пресекает взаимодействие рецептора с фактором роста, поэтому опухолевая клетка не получает сигнала о делении, а чувствительность к гормональным препаратам и цитостатикам повышается.
Трастузумаб сопровождает цитостатическую и гормональную терапию, эффект от использования его в качестве единственного лекарства против рака молочной железы очень скромен.
Рекомендации обязывают использовать трастузумаб при наличии гена HER2 при любом противоопухолевом лечении пока только на протяжении года, но изучение результатов 6-месячной терапии продолжается. Препарат значимо удорожает лечение – 17 введений в течение года обходятся очень недёшево, поэтому исследователи стараются найти оптимальное соотношение длительности лечения и его эффективности.
Кардиотоксичность герцептина
Препарат герцептин обладает токсическим действием на миокард сердца, вызывая хроническую сердечную недостаточность и патологическое расширение желудочков сердца больше чем у трети больных. Женщинам с исходной сердечной патологией лечение проводят под контролем ЭХО-ЭКГ и в сокращённом режиме.
По большому счёту, каждая женщина, получающая химиотерапию с трастузумабом, должна иметь не только личного врача-химиотерапевта, но и личного врача-кардиолога, ориентированного в превратностях влияния противоопухолевых лекарств на сердечно-сосудистую систему.
Парадоксально, но в штатах государственных онкологических учреждений нет кардиологов, обычные кардиологи поликлиник и кардиологических диспансеров прекрасно разбираются в болезнях сердца, но не знают, какой противоопухолевый препарат какую патологию сердечно-сосудистой системы вызывает.
Кардиологи Юсуповской больницы не просто ориентированы, они специализируются на проблемах токсических повреждений миокарда, возникающих в процессе химиотерапии. Они всегда готовы оказать высококвалифицированную помощь и нацелены на профилактику патологии сердца.
Анализ FISH при раке груди
Онкопатологии молочной железы представляют собой один из самых распространенных недугов. Потому к такой проблеме необходимо относиться максимально внимательно. Диагностические инструменты для определения данного типа рака за последние несколько лет серьезно изменились. Одной из новых методик становится флуоресцентная гибридизация in situ или FISH (фиш).
Для чего делается FISH-анализ?
Онкопатология МЖ может предусматривать разный гормональный статус, определяемый для формирования стратегии терапии. Существует несколько определенных маркеров онкологических новообразований. Так, рецептор HER2-neu отвечает за рост количества клеток методом деления.
При наличии онкологии МЖ в 25–30 % случаев активность этого гена увеличивается, он кодирует белок, называемый HER2-neu. Это активирует процессы бесконтрольного наращивания количества клеток, соответственно онкообразование быстро «разрастается», повышает неблагоприятный прогноз при терапии. Учитывая данный фактор, было изготовлен особое лекарство. Специализированное моноклональное антитело способно устранить активность данного белка, приостановить онкологические процессы. Но для такого воздействия препарата требуется точное выявление экспрессии белка. Это осуществляется посредством специализированного фиш-теста.
Когда проводится FISH-тест
Определение статуса указанного выше белка в клетках при онкологии МЖ возможно с использованием разных методик. Одним из самых простых становится иммуногистохимическое исследование. Но порой оно не позволяет получить точный ответ, результат. В результатах врач указывается:
0-1+ — результат негативный.
2+ — статус не определен.
3+ — статус позитивный.
Такое тестирование проводится при неопределенном результате изучения белка. Поскольку определить экспрессию гена не удается, невозможно сказать, подойдет ли такая стратегия терапии для пациента.
Сегодня нет методик FISH-тестирования, которые позволяли бы определять онкопатологии МЖ на ранних стадиях. Исследование назначается тем, у кого диагностировано или удалено новообразование, требуется подбор стратегии терапии.
Специфика реализации исследования
Для осуществления тестирования по методике FISH необходимы онкоклетки из исследуемого участка. Зачастую при назначении этого исследования пациентке уже провели нужные анализы. Иногда биопсия реализуется повторно.
После биопсии выполняется иммуногистохимическое исследование. Это более бюджетный, не менее точный инструмент по определению статуса гена при онкологии МЖ. Если данные указываются как 2+, то необходимо отправлять ткань на FISH-тестирование.
Повторно выполнять биопсию перед FISH-тестом не нужно, анализ реализуется посредством того же образца, который применялся в предыдущем исследовании. Специфика тестирования предполагает применение ДНК-зондов, связываемых с конкретными клеточными агентами. Для определения зонда применяются флуоресцентные пигменты.
При определении статуса белка значимыми являются 17 хромосома, где находится ген, кодирующий этот белок. Тестирование позволяет определить количество хромосом, копий гена в опухолевых клетках. Ткань проходит подготовительные мероприятия, размечается с помощью ДНК-зонда, затем специалист изучает срез ткани посредством специализированного оборудования.
Плюсы и минусы методики
Инновационный метод обеспечивает эффективное исследование HER2-статуса при онкопатологиях МЖ, подбор эффективной терапевтической стратегии. Необходимость в разработке данной методики возникла при создании специализированного медикамента Трастузумаб (Герцептин).Данные позволяют полагать, что при назначении данного препарата на начальных этапах онкопатологий груди возможно на 50 % снизить риски возникновения рецидива, смертность сокращается на 30 %.
Медикамент предусматривает направленное воздействие на клетки с активным HER2-neu. При других случаях и факторах развития онкообразований данный препарат не несет такой эффективности. Тестирование предусматривает быстрые сроки проведения, высокую чувствительность, а также специфичность. Зачастую тестирование занимает всего 2–3 дня.
Для реализации тестирования требуется специализированные технические устройства, которые достаточно дорого стоят, расходники. Потому пока провести данную процедуру можно только в крупных онкоклиниках. Кроме того, тестирование предусматривает достаточно высокую стоимость. Однако она полностью оправдывается эффективностью проведения тестов при онкологии молочной железы.
Современный FISH-тест представляет собой инновационный диагностический метод при онкопатологиях молочной железы, применяемый в специфичных случаях. Хотя он предполагает высокую точность, его не назначают всем пациентам, так как существуют другие методики исследований, но при наличии показаний такой тест позволит сформировать эффективную стратегию терапии, улучшить прогноз выживаемости пациента при онкологических патологиях.
