Цитробактериоз: что нужно знать
Цитробактериоз – это острое инфекционное заболевание пищеварительной системы, возникающее в результате заражения бактериями рода Citrobakter, сопровождающееся выраженной интоксикацией и обезвоживанием.
Citrobakter присутствует в почве, воде и фекалиях человека и животных, поэтому инфекция передается, как правило, фекально-оральным путем. Заражение человека может наступить вследствии употреблении в пищу недостаточно пастеризованного молока, молочных продуктов и сливочного масла, выпущенных недобросовестными производителями, употребление загрязненных кондитерских изделий, а также в результате плохой прожарки мяса и птиц животных.
Дети, в особенности те, у которых ослаблен иммунитет, могут заразиться через грязные руки, игрушки, при контакте с взрослыми, являющимися носителями этих бактерий и прочими контактно-бытовыми способами.
Все бактерии данного вида обладают устойчивостью к дезинфицирующим средствам и по своей структуре схожи с сальмонеллами.
Протекать заболевание может как гастрит, сильное пищевое отравление, энтерит, гастроэнтерит. Его инкубационный период очень короткий – от 2 до 5 часов. Гастрит начинается с появления болей в области эпигастрия, повторяющейся рвоты, периодически усиливающейся тошноты. Температура тела может подниматься до 38,5 градусов. Остальные симптомы отравления могут быть выражены размыто. Длится острое состояние на протяжении 1-2 дней.
Основным лабораторным показателем цитробактериоза является наличие бактерии цитробактер в анализе кала в количестве превышающем допустимую норму. В случае с маленькими детьми анализ кала берут несколько раз и сравнивают количество колоний. Если оно неуклонно растет, то следует как можно быстрее принимать меры.
Бактериологическая лаборатория ФБУЗ «Центра гигиены и эпидемиологии в Тульской области» обладает всеми необходимыми ресурсами для проведения бактериологических исследований на цитробактериоз, что позволяет значительно ускорить диагностику заболевания, поставить адекватный диагноз и своевременно назначить лечение.
В практике бактериологической лаборатории имеется опыт обнаружения цитробактера у детей: при обследовании группы детей школьного возраста при подозрение на инфекционное заболевание у 40% был обнаружен Citrobacter freundii, что было также подтверждено на анализаторе полуавтоматическом бактериологическом Autoscan 4.
Профилактика этой инфекции заключается в соблюдении правил личной гигиены, тщательном мытье и термической обработке продуктов питания, мытье рук перед приемом пищи, соблюдении сроков годности продукта и товарного соседства.
Университет
Около 60% микрофлоры находится в желудочно-кишечном тракте. Любой сбой в слаженной работе микромира способен вызвать проблемы многих систем и функций.
1. Что такое дисбактериоз? Часто можно встретить другие обозначения — дисбиоз и синдром усиленного микробного роста.
Термин «дисбактериоз» предложил в 1916 году немецкий ученый Альфред Ниссле, обозначив этим словом количественное изменение кишечной палочки. В 1972-м советский физиолог Александр Уголев охарактеризовал дисбактериоз как изменение качественного и количественного состава бактериальной флоры кишечника, возникающее под влиянием неправильного питания, физического и психического стресса, тяжелых заболеваний, приема антибактериальных препаратов, хирургических вмешательств, иммунодефицита, загрязнения окружающей среды и др.
В нашей стране термин «дисбактериоз» ввел во врачебный обиход академик Александр Билибин (1897–1976) для именования качественных и количественных сдвигов в микробиоценозе кишечника, прежде всего толстого, нарушения видового и количественного состава микробных популяций в определенном биотопе. Российский ученый профессор Яков Циммерман предложил термин «дисбиоз»: он отражает изменение не только бактериальной флоры, но и грибов, а также связанные с нарушением микроэкологии кишечника метаболические, трофические и другие расстройства макроорганизма.
Сегодня термины «дисбактериоз» и «дисбиоз» оспариваются и даже отрицаются представителями западной медицины и их сторонниками в нашей стране. Вместо понятия «дисбиоз» в специальной литературе популяризируется «синдром избыточного бактериального роста» (СИБР) (в англоязычной литературе — bacterial overgrowth syndrome). Однако он отражает иную патофизиологическую и клиническую ситуацию — распространение микробного роста в тонкую кишку (микроорганизмов более 10 5 в 1 мл кишечного содержимого у взрослых и более 10 4 в 1 мл — у детей), т. е. не качественный, а количественный сдвиг в микроценозе.
В МКБ-10 терминов «дисбактериоз», «дисбиоз» и «СИБР» нет. Но в клинической практике ими активно пользуются.
2. Можно ли назвать дисбиоз и СИБР самостоятельными заболеваниями? Требуют ли они лечения?
СИБР и дисбиоз — это вторичные синдромы, сопутствующие многим патологическим процессам.
Нарушение баланса кишечной микрофлоры отмечается при синдроме раздраженного кишечника, диарее путешественников, антибиотико-ассоциированной, воспалительных заболеваниях кишечника и другой патологии. Однако это не означает, что СИБР и дисбиоз не нужно диагностировать и лечить. Расстройства микробиоценоза кишечника и увеличение числа условно-патогенной и патогенной микрофлоры кишечника (золотистый стафилококк, энтеропатогенная кишечная палочка, энтеробактер, протей, клебсиелла, синегнойная палочка, шигеллы, кампилобактер, клостридии, кандиды и др.) требуют терапии, т. к. вызывают и поддерживают местное воспаление, сопровождаются интоксикацией и могут привести к развитию сепсиса. При субкомпенсированном и декомпенсированном кишечном дисбиозе лечение обязательно.
3. В чем причины проблем с кишечной микрофлорой?
Дисбиоз развивается вследствие инфекционных заболеваний и постинфекционных состояний; после антибиотико-, гормоно- и
полихимиотерапии, применения слабительных средств и сорбентов; хирургического удаления части кишечника. Играют роль избыточное, несбалансированное и беспорядочное питание; дефицит пищевых волокон в рационе; употребление продуктов с обилием консервантов, красителей, ксенобиотиков; радиационные повреждения кишечника; гидроколонотерапия.
СИБР появляется при гипо- и анацидных состояниях желудка; лактазной и дисахаридазной недостаточности, целиакии; хроническом панкреатите и холецистите, воспалительных заболеваниях тонкой кишки (болезнь Крона, болезнь Уиппла, васкулиты); нейропатиях и миопатиях; опухолях кишечника и хронических запорах.
4. Как диагностировать нарушения микробиоценоза?
Поскольку в кишечнике живут более 500 видов бактерий (их общая масса может достигать 2,5 кг), определить нарушения количественного и качественного состава микрофлоры непросто. Применяются следующие методики:
классический бактериологический анализ кала (посев на дисбиоз) с определением основных видов микроорганизмов;
посев на бактериальные среды кишечного содержимого, полученного эндоскопически (для определения СИБР);
дыхательный тест с лактулозой, ксилозой, меченной изотопом углерода 14С;
бактериологическое исследование кала путем ПЦР, FISH-методом, изучение микробных метаболитов (индикан, фенол, паракрезол, аммиак и др.);
хромато-масс-спектрометрия родового состава микроорганизмов, позволяющая обнаружить живые и мертвые микроорганизмы и узнать их концентрации.+
5. Как проявляется дисбактериоз?
Симптомы неспецифичны; могут наблюдаться при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, не сопровождающихся нарушением микробиоценоза. Основные признаки — диспепсический синдром (отрыжка, неприятный вкус во рту, повышенное газообразование, вздутие живота, урчание, понос, боли и зуд в области заднего прохода), синдром малдигестии (нарушение переваривания и всасывания жиров, мяса, углеводов), боль в животе, аллергические реакции (вздутие живота, жидкий пенистый стул, кожный зуд, крапивница, отек Квинке, бронхоспазм, полиартралгии).
Весьма характерно наличие внутренней интоксикации: слабость, быстрая утомляемость, отсутствие аппетита, головные боли, повышение температуры. При длительном течении развивается синдром мальабсорбции, проявляющийся поливитаминной недостаточностью, снижением массы тела, анемией.
За сутки в пищеварительном тракте образуется несколько литров газа, который в основном поглощается кишечной стенкой. Около 600 мл ежедневно выделяется через прямую кишку, а при избыточном росте бактерий его количество увеличивается до 2 л и более.+
6. Какое лечение необходимо при СИБР и дисбиозе?
Показания к уничтожению микробного загрязнения (к деконтаминации) — СИБР и наличие высоких титров условно-патогенной микрофлоры, представляющей угрозу переноса микробов в тонкую кишку. Для этого применяется несколько групп лексредств:+
препараты спорообразующей транзиторной флоры;
Антибиотики не должны всасываться из кишечника и подавлять рост нормальной микрофлоры. Этим требованиям отвечает рифаксимин — местный кишечный антисептик, который хорошо переносится и не вызывает бактериальной резистентности. Препарат имеет широкий спектр действия против условно-патогенных и патогенных грамположительных (стрептококки, стафилококки, энтерококк, туберкулезная палочка), грамотрицательных (шигелла, сальмонелла, иерсиния, протей, кишечная палочка, пептострептококк, холерный вибрион), аэробных бактерий, а также анаэробных грамположительных (клостридии, пептококк) и грамотрицательных (бактероиды, пилорический хеликобактер). Это лексредство с успехом используется для лечения острых кишечных инфекций, коррекции СИБР, санации толстой кишки при дисбактериозе и печеночной энцефалопатии. Рифаксимин применяется в течение недели по 400 мг 3 раза в сутки. При этом уровень выдыхаемого водорода снижается в 3–5 раз уже к третьему дню терапии, что свидетельствует о быстрой санации тонкой кишки.
Можно использовать и другие антибактериальные препараты: производные оксихинолов (интетрикс), нитрофуранов (нифуроксазид, или стопдиар), нитроимидазолы (метронидазол, тинидазол), энтерофурил. Метронидазол и тинидазол показаны при контаминации анаэробными микроорганизмами. Интетрикс и нифуроксазид обладают антимикробным действием по отношению к шигеллам, сальмонеллам, иерсиниям, кампилобактеру, протею, клебсиелле, патогенным коккам, а интетрикс также подавляет рост грибов и амеб. Длительность терапии при СИБР — 12–14 дней.
При толстокишечном дисбиозе IV степени и неэффективности кишечных антисептиков необходимы антибиотики общерезорбтивного действия, предпочтительно фторхинолоны (офлоксацин, ципрофлоксацин, норфлоксацин, пефлоксацин); при псевдомембранозном колите — ванкомицин, метронидазол, энтерол, бацитрацин.
Показания к назначению антибиотиков: микробное загрязнение тонкой кишки; генерализованная форма дисбактериоза; выраженный интоксикационный синдром; упорный диарейный синдром; тяжелый иммунодефицит.
Применение бактериофагов при кишечном дисбиозе не оправдало возлагаемых на них надежд: оно провоцирует мутации бактерий.
Для снятия симптомов дисбиоза используют регуляторы кишечной моторики (дебридат, метеоспазмил, мотилиум, дицетел, мукофальк, имодиум), энтеросорбенты (смекта, энтеросгель, энтеродез).
7. Какие биологические препараты применяют для лечения дисбиоза?
Есть несколько групп биологических средств коррекции нарушений микрофлоры кишечника. Эубиотики, или пробиотики, содержат живые облигатные микроорганизмы; симбиотики — комбинацию из нескольких видов живых организмов; пребиотики — стимуляторы роста нормальных микроорганизмов; синбиотики — живые бактерии; пребиотические комплексы — рациональную комбинацию из пробиотиков, пребиотиков, сорбентов, витаминов, микроэлементов.
8. Как воздействуют пробиотики?
В широком смысле слова это живые микроорганизмы и вещества микробного и другого происхождения, оказывающие благоприятный эффект на физиологические функции, биохимические и поведенческие реакции организма через оптимизацию его микроэкологического статуса.
Выделяют 4 поколения пробиотиков. К 1-му относятся однокомпонентные (колибактерин, бифидумбактерин, лактобактерин), т. е. содержащие 1 штамм бактерий.
Препараты 2-го поколения (бактисубтил, биоспорин, споробактерин и др.), основанные на использовании неспецифических для человека микроорганизмов, являются самоэлиминирующимися антагонистами патогенной микрофлоры.
Препараты 3-го поколения включают поликомпонентные пробиотики, в составе которых несколько симбиотических штаммов бактерий одного вида (ацилакт, аципол и др.) или разных видов (линекс, бифиформ) с взаимоусиливающим действием.
К 4-му поколению относят иммобилизованные на сорбенте бифидосодержащие препараты (бифидумбактерин форте, пробифор). Сорбированные бифидобактерии эффективно колонизируют слизистую оболочку кишечника, оказывая более выраженное протективное действие, чем несорбированные аналоги.
Эффекты воздействия данных лексредств на организм человека:
синтез нутриентов и антиоксидантов (витаминов С, К, группы В, фолиевой кислоты, короткоцепочечных жирных кислот, бутирата, оксида азота);
защитная функция (колонизация слизистой толстого кишечника, выработка лизоцима, бактериоцинов, снижение продукции эндотоксинов, снижение мутагенности);
иммуномодулирующая (стимуляция макрофагов, синтеза IgA, подавление синтеза IgE, модулирование цитокинового ответа);
пищеварительная (расщепление углеводов, клетчатки, жиров, белков, деконъюгация желчных кислот);
цитопротективная (нейтрализация токсических субстратов и метаболитов, стимуляция регенерации и дифференцировки эпителия кишечника, антиканцерогенный эффект бутирата через регуляции апоптоза).
9. Что такое пребиотики?
Это препараты или БАД немикробного происхождения. Они не перевариваются в кишечнике, положительно влияют на организм, стимулируя рост и/или метаболическую активность нормальной микрофлоры кишечника. Типичные представители пребиотиков — соединения, относящиеся к классу низкомолекулярных углеводов: дисахариды, олигосахариды, которые широко распространены в природе. Пребиотики не должны подвергаться гидролизу пищеварительными ферментами и абсорбироваться в верхних отделах пищеварительного тракта. Они селективно стимулируют 1 вид или определенную группу микроорганизмов толстой кишки.
В качестве пребиотиков используют олигосахариды (соевый олигосахарид, фруктоолигосахариды); моносахариды (ксилоза); дисахариды (лактулоза); полисахариды (пектины, декстрин, инулин), пищевые волокна трав (псиллиум), злаковых (отруби, Рекицен-РД), фруктов; пептиды (соевые, молочные); ферменты (протеазы сахаромицетов и др.); аминокислоты (валин, аргинин, глутаминовая кислота); антиоксиданты (каратиноиды, глутатион, витамины А, С, Е, соли селена); ненасыщенные жирные кислоты; органические кислоты (уксусная, пропионовая, лимонная); другие вещества (лецитин, парааминобензойная кислота, лактоферрин, лектины, экстракты водорослей, растительные и микробные экстракты).
Пребиотики лучше использовать на начальных этапах дисбиоза, а также для его профилактики.
10. Назначают ли при дисбиозе фитотерапию?
Их лечебный эффект несильный и наблюдается только после длительного воздействия.
В зависимости от формы и выраженности дисбиоза пациентам с нарушениями кишечной микрофлоры для домашнего лечения можно рекомендовать при:
стафилококковом дисбактериозе — эвкалипт, зверобой, аир, календулу, барбарис, мать-и-мачеху, исландский мох. В рационе должны присутствовать ягоды черники, рябины, земляники, малины; чеснок, хрен;
микотическом кандидозном дисбактериозе — липу, тимьян, почки березы, эвкалипт, мяту, мелиссу, фенхель, шалфей, аир, исландский мох, валериану, веронику, девясил, бадан. Надо употреблять в пищу бруснику, морковь, черемшу; дрожжевой, картофельный, тыквенный и рисовый экстракты;
гнилостном дисбактериозе — крапиву, бруснику, тмин, смородину, лапчатку прямостоячую, бадан, почки березы, чистотел, полынь горькую, маклею, лопух. Показаны абрикосы, ягоды смородины, рябины, брусники; топинамбур, красный сладкий перец;
протейном дисбактериозе — эвкалипт, календулу, аир, подорожник, зверобой, ольху, бадан, полынь, лапчатку прямостоячую. Полезны клюква, малина, смородина, перец, чеснок, лук.
Различают 3 степени нарушений микробиоценоза.
Средняя. Увеличивается количество аэробов. Снижается титр бифидофлоры. Число анаэробов и аэробов примерно одинаковое. Появляются атипичные формы кишечной палочки, повышается титр условнопатогенных микроорганизмов.
Тяжелая. Количество аэробов превышает число анаэробов. Резко снижен титр бифидо и лактобактерий. Увеличено число условнопатогенной флоры — 10 7 и выше. Пациенты жалуются на расстройство стула, метеоризм; есть признаки интоксикации: повышенная температура, слабость, быстрая утомляемость.
Анатолий Близнюк, доцент кафедры поликлинической терапии БГМУ, кандидат мед.наук
Медицинский вестник, 25 июня 2014
Citrobacter (цитробактер)
Цитробактер (лат. Citrobacter) — род грамотрицательных, споронеобразующих, факультативно анаэробных бактерий. Представитель нормальной, условно-патогенной микрофлоры кишечника человека.
Сitrobacter в систематике бактерий
Род цитробактер (Citrobacter) входит в семейство энтеробактерии (Enterobacteriaceae), порядок энтеробактерии (Enterobacteriales), класс гамма-протеобактерии (γ proteobacteria), тип протеобактерии (Proteobacteria), царство бактерии.
Сitrobacter — возбудитель заболеваний человека и животных
Цитробактер является одной из самых частых причин внутрибольничных ангиогенных инфекций и инфекций мочевыводящих путей. Цитробактер способен вызывать вспышки гастроэнтеритов и токсикоинфекций, внутрибольничные инфекции, менингиты, абсцессы мозга, урологические заболевания, гнойные инфекции и сепсис у детей и взрослых людей. В регионах России в последние годы периодически происходят массовые отравления, в том числе в детских учреждениях, вызванные цитробактером, основной причиной которых является нарушение технологии приготовления пищи.
Источником инфекции являются люди и животные. Механизм передачи цитробактера — фекально-оральный. Основной путь передачи — пищевой, через молоко, молочные продукты, масло, кондитерские изделия, мясо птиц и животных. У ослабленных детей раннего возраста возможен контактно-бытовой путь заражения через игрушки, предметы ухода, руки персонала.
Цитобактериоз может протекать по типу пищевого отравления в виде гастрита, энтерита или гастроэнтерита. Инкубационный период цитробактериоза от 2 до 5 часов.
Гастрит начинается остро с тошноты, повторной рвоты, боли в эпигастральной области. Температура тела, чаще всего, в пределах от 37–37,5 до 38–38,5 ° С. Симптомы отравления выражены умеренно. Продолжительность — 1–2 дня.
Гастроэнтерит начинается остро с тошноты, повторной рвоты, болей в животе. Стул частый, жидкий, иногда с примесью слизи, до 10 раз в сутки. Боль в животе в первые дни болезни может быть выраженной, локализуется преимущественно в эпигастральной области, при пальпации определяется болезненность по ходу тонкой кишки. Понос, чаще всего, на несколько часов опережает развитие симптомов отравления. Температура тела повышается до 38° С, сохраняется не более 5 дней. Прогноз благоприятный, продолжительность цитробактериоза — от 4 до 6 дней.
Диагноз на цитробактериоз устанавливается после проведения специальных лабораторных исследований.
Цитробактер способен самостоятельно или в ассоциации с другими микробами вызывать заболевания у домашних и диких животных, рыб и пчёл. В современной России имеются прецеденты, когда циторбактер выявляли в фабрично изготовленном комбикорме. Корма, зараженные цитробактером или с подозрением на цитробактер требуют обязательной проварки при температуре не ниже 100° С не менее часа.
На сайте GastroScan.ru в разделе «Литература» имеется подраздел «Микрофлора, микробиоценоз, дисбиоз (дисбактериоз)», содержащий статьи, затрагивающие проблемы микробиоценоза и дисбиоза отделов ЖКТ человека.
Цитробактер в результатах анализа кала на дисбактериоз
При избыточном росте цитробактера, как следствии дисбактериоза, при медикаментозной терапии применяются различные пробиотки (Бифидумбактерин, Бифиформ, Лактобактерин, Ацилакт, Аципол и др.) и/или адекватные конкретному штамму цитробактера и причине дисбактериоза бактериофаги и антибиотики.
В образцах злокачественных колоректальных новообразований человека концентрация Citrobacter spp. повышена (Marchesi J.R., Dutilh B.E., Hall N. et al. Towards the human colorectal cancer microbiome. PLoS One 2011; 6: e20447).
Антибиотики, активные и неактивные в отношении цитробактера
Антибактериальные средства (из имеющих описание в данном справочнике), активные в отношении цитробактера: ципрофлоксацин, норфлоксацин, офлаксацин. В отношении Citrobacter koseri и Citrobacter freundii активен левофлоксацин.
Цитробактер слабо чувствителен к нифуроксазиду.
Свойства бактериофагов Citrobacter
АННОТАЦИЯ
ABSTRACT
The article presents the research results according to the indication, identification, and materials for the study of biological properties of bacteriophages isolated from the environmental objects. Selected 4 bacteriophage active against bacteria of the genus Citrobacter. Describes the results of a study of their basic biological properties: morphology negative colonies; lysis; lytic spectrum of activity; the specificity of action; resistance to chloroform and temperature stability.
За сравнительно большой срок существования в качестве отдельной систематической группы, относительно экологии цитробактеров известно не очень много, что объясняется длительным отсутствием подборки дифференцирующих тестов. Очевидно то, что бактерии широко распространены в окружающей среде, так как их обнаруживают в самых разнообразных пищевых продуктах, воде, почве различных стоках. Цитробактеры выделяют из кишечника и мочевыводящих путей человека, лошадей, крупного рогатого скота, свиней, собак, грызунов, птиц, рептилий и насекомых [5 с.29, 8 с.75, 10. с.293, 11 с.188, 12 с.1789].
Заболевания, вызванные бактериями рода Citrobacter, или ассоциацией его с другими возбудителями болезней, могут возникать у рыб, домашних животных, диких животных, пчел. [5 с.30,12 с.1791]
Имеет также еще очень важное значение и то, что цитробактеры проявляют сравнительно высокую химиорезистентность. Наибольшую устойчивость к антибактериальным препаратам проявляет С. freundii (по сравнению с С. koseri и С. amalonaticus). С 90-х гг. XX века отмечен особенно быстрый её рост. Следовательно, возникает значительная проблема при лечении заболеваний, вызванных данным микроорганизмом – необходимо тщательнее подбирать антибактериальные вещества, а лучше подобрать альтернативные способы лечения и профилактики заболеваний с их участием.
Исходя из вышесказанного значение лечебных и профилактических мероприятий, связанных с выше названным патогеном приобретает все большее значение.
Цель исследования: провести индикацию и идентификацию вирулентных фагов бактерий рода Citrobacter в объектах окружающей среды.
Материалом для исследования послужили почва, вода открытых водоемов, сточные воды и песок.
В качестве индикаторных культур использовали бактерии рода Citrobacter (3 штамма), выделенные нами из патологического материала и пищевых продуктов.
При проведении исследований использовали питательные среды мясопептонный агар (НПО «Питательные среды», г. Махачкала), 0,3%-ный, 0,7%-ный, 1,5%-ный; мясопептонный бульон ТУ 10-02-02789-176-94(ООО «БиоКомпас-С», РФ); висмут-сульфит агар (ФГБУН, ГНЦ ПМБ, РФ) и среда Эндо (ФГБУН, ГНЦ ПМБ, РФ).
Оборудование. Холодильники бытовые; микроскопы МБИ-6, ультратермостаты УТ-15У4,2; термостаты ТС-80М-2; центрифуги лабораторные ОПн-8УХЛ4,2 и ЦЛС-3; аппарат ультрафиолетового облучателя с лампой ДРБ8-18; колбы мерные; лабораторная посуда; стандарты мутности на 0,5 и 1,0 млрд. микробных клеток; фильтры фирмы Millipore (filter type: 0,22 μm GV).
Методы. При выполнении исследований применяли методы выделения бактериофагов из культур, описанные и использованные И.П.Ревенко [7 с.12]. Фаги выделяли из объектов окружающей среды методом, предложенным Адельсон [2 с.186]. Изучение биологических свойств и селекцию бактериофагов, а также повышение их литической активности проводили по методикам, предложенным М.Adams [1 с.521] и описанной в своих исследованиях С.Н. Золотухиным [4 с.58 ] и Пульчеровской Л.П. [6 с.73].
Первым этапом наших исследований была попытка выделить бактериофаги Citrobacter из имеющихся полевых штаммов бактерий рода Citrobacter. Мы предполагали наличие лизогенных культур, а как известно из литературных данных такие бактериофаги обладают более выраженной специфичностью [3 с.9]. Вначале мы использовали методику выделения фагов без воздействия на них индуцирующего фактора, а затем с воздействием индуцирующего фактора, после чего фильтровали через фильтры фирмы Millipore (filter type: 0,22 μm GV). В качестве индуцирующего фактора применяли воздействие на бактерии ультрафиолетовых лучей в течение 30 секунд мощностью которой в области 254нм.
Полученный фильтрат на наличие фага исследовали на имеющихся культурах рода Citrobacter методом агаровых слоев. Результат получили отрицательный.
Свои исследования мы продолжили по методикам выделения фагов из объектов внешней среды, предложенной Гольдфарбом (1961) и описанные в диссертационных работах Золотухиным С.Н. (1996), Пульчеровской Л.П (2004) и Феоктистовой Н.А. (2006) и др.
Исследуемый материал засевали с индикаторными культурами в МПБ во флаконах создавая условия контакта индикаторных культур с искомыми бактериофагами. А именно во флакон, содержащий 0,5 литра мясопептонного бульона, добавили по 1,0 мл 18-ти часовых культур, всех имеющихся у нас штаммов Citrobacter. Флакон ставили в термостат при 37 0 С на сутки. Затем смесь бактерий центрифугировали при 2000 об/мин в течение 30 минут, фильтровали. Полученный фильтрат инактивировали от сопутствующей микрофлоры тремя способами:
— 2-ой – обрабатывали хлороформом в соотношении 1:10 в течение30 минут;
— 3-й – очистку фагов осуществляли методом фильтрации с использованием мембранных фильтров фирмы Millipore (filter type: 0,22 μm GV). Наличие фага в фильтрате выявляли при его посеве на плотные питательные среды методом агаровых слоев.
В результате исследований 7 проб объектов окружающей среды удалось по указанной схеме выявить 4 изолята искомых бактериофагов (CIT-1, CIT-2 CIT-3 CIT-4) методом фильтрации. Результаты опыта представлены в табл. 1.
Таблица 1
Источники выделения бактериофагов Citrobacter
