C. davisae C. lapegei Вид Cedecea 001 (также известный как вид Cedecea 3) C. neteri (ранее известный как вид Cedecea 4 или вид Cedecea 002) вид Cedecea 012 (также известный как вид Cedecea 5)
Содержание
История рода
Бактерии Cedecea были открыты в 1977 году группой ученых из CDC и первоначально назывались «Кишечная группа 15». В 1980 году Патрик А.Д. Гримонт и Франсин Гримонт предложили название рода Cedecea для этой группы. Это конкретное название было дано «Enteric Group 15» от аббревиатуры Центра по контролю заболеваний (CDC), где была обнаружена группа бактерий. На данный момент идентифицировано шесть видов. В настоящее время названы три штамма, а три остаются неназванными.
Клинический
Штаммы Cedecea редко выделяются из окружающей среды или живых тканей человека. Однако штаммы один или несколько раз выделяли из следующих образцов человека: мокрота, кровь, кожные раны, желчный пузырь, моча и легочная ткань. Эти образцы были взяты у нескольких пациентов пожилого возраста, с ограниченными возможностями здоровья или с ослабленным иммунитетом. Несмотря на то, что эти штаммы были изолированы, их роль в заболевании и клиническое значение еще предстоит выяснить.
Пациентам, инфицированным Cedecea, может помочь антибактериальная терапия; однако это может быть проблемой из-за устойчивости штаммов Cedecea к ряду антимикробных агентов. Штаммы Cedecea устойчивы к следующим антимикробным агентам: цефалотину, цефалоспоринам расширенного спектра, колистину и некоторым аминогликозидам.
Экология
Первый корейский случай Cedecea lapagei Пневмония у пациента с хронической обструктивной легочной болезнью
Cedecea, род семейства Enterobacteriaceae, был назван в 1981 году из инициалов центров США по контролю и профилактике заболеваний [1]. На сегодняшний день выявлено всего пять видов; в настоящее время три из них названы (C. davisae, C. lapagei и C. neteri), тогда как два остаются неназванными [1, 2]. Инфекции, вызванные видами Cedecea, нечасты [2, 3, 4, 5, 6]. Здесь мы сообщаем случай пневмонии C. lapagei у пациента с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ).
Проводили культуру мокроты и два набора культур крови из отдельных периферических вен. Культуры крови испытывали отрицательный результат, но на гранулометрических стержнях и некоторых нейтрофилах, содержащих внутриклеточные организмы, наблюдалось на мазке препарата мокроты (рис.1А). Белые цветные, не гемолитические колонии преимущественно росли на пластине из агара крови (рис.1B), а грамотрицательные коккобациллы наблюдались на грамм-мазках (рис.1C). Изолят был бесцветным на пластинке агара MacConkey, а каталаза-положительный и оксидаз-отрицательный. Используя масс-спектрометрию лазерной десорбции / ионизации методом масс-спектрометрии (Bruker Daltonik GmbH, Бремен, Германия) и систему GN Vitek2 (bioMérieux, Marcy l’Etoile, Франция), организм был идентифицирован как C. lapagei, с оценка 2.322 в системе Bruker и с вероятностью 99,9% в системе Vitek2.
Для подтверждения идентичности изолята проводили секвенирование гена 16S рРНК. Тем не менее, последовательность гена 16S рРНК в 1402 п.о. изолята разделяла 99,6% идентичность с AB086230 (C. neteri) в базе данных eZtaxon (http://www.ezbiocloud.net). Для устранения расхождения были проведены дополнительные тесты: биохимические тесты, а также секвенирование гена dnaJ, который, как сообщается, был полезен для идентификации Enterobacteriacea [7]. Биохимические тесты были совместимы с характеристиками C. lapagei; орнитиндекарбоксилазу и получение кислоты из сахарозы, D-сорбита, раффинозы, D-ксилозы и мелибиозы были отрицательными [8]. Последовательность гена dnaJ 719 bp изолята разделяла 99,3% идентичность с AB272620 (C. lapagei) и 91,1% идентичность с AB272621 (C. neteri) в базе данных GenBank. Филогенетические деревья показали, что C. lapagei имеет внутривидовую гетерогенность гена 16S рРНК, и этот изолят был наиболее близок к C. lapagei на основе гена dnaJ (фиг.2).
Противомикробную восприимчивость тестировали с использованием карты AST-GN27 (bioMérieux). Используя контрольные точки CLSI для Enterobacteriaceae для интерпретации [9], изолят был определен восприимчивым к пиперациллину, цефотаксиму, цефтазидиму, цефепиму, имипенему, амикацину, ципрофлоксацину, тетрациклину и триметопримусульфаметоксазолу, но устойчивым к амоксициллин-клавулановой кислоте и цефокситину.
После определения наличия возбудителя пациент был обработан цефподоксимом в течение одной недели. Патоген не наблюдался в последующих респираторных культурах, и пациент был выписан.
Клиническая значимость и спектр заболеваний Cedecea еще не были четко выяснены; однако у пожилых пациентов (возраст> 60 лет), которые ослаблены иммунитетом или имеют множественные сопутствующие заболевания, Сообщалось, что Cedecea вызывает бактериемию и пневмонию [2]. Точная идентификация на уровне видов важна для понимания инфекций Cedecea. Идентификация Cedecea на уровне видов возможна с использованием обычных биохимических тестов [8]; поэтому его идентификация с использованием молекулярных характеристик не установлена. Поэтому до сих пор количество последовательностей на GenBank невелико, и анализ цельного генома не был установлен. Это исследование показало, что секвенирование гена dnaJ может быть полезным при молекулярной идентификации Cedecea, поскольку он имеет гетерозиготную гетерогенность 16S рРНК.
Хотя C. lapagei выделяли только в образце мокроты у пациента, мы пришли к выводу, что у пациента была пневмония C. lapagei на основании его респираторных симптомов, повышенных уровней CRP и фагоцитоза нейтрофилами. Поэтому мы сообщаем о первом случае пневмонии C. lapagei в Корее. Настоящие данные свидетельствуют о том, что следует проявлять хорошую осторожность при его молекулярной идентификации, поскольку она имеет внутривидовую гетерогенность, обусловленную геном 16S рРНК.
Не сообщалось о потенциальных конфликтах интересов, имеющих отношение к этой статье.
Колониальная и микроскопическая морфология Cedecea lapagei. (A) Нейтрофил, содержащий внутриклеточные грамотрицательные коккобациллы от мазка препарата образца мокроты (окраска грамма, × 1000). (B) Белые цветные и негемолитические колонии на пластине агара крови после 48 часов инкубации при 35 ° C с 5% CO2. (C) Грамотрицательные коккобациллы из препарата мазков из пластыря из агара (окраска грамма, × 1000).
Соседние филогенетические деревья, основанные на частичных последовательностях генов 16S рРНК (1300 пар оснований) и dnaJ (719 п.о.) гена редких штаммов Enterobacteriaceae. (A) Филогенетическое дерево гена 16S рРНК показало, что Cedecea lapagei имеет гетерозиготную гетерогенность гена 16S рРНК. (B) Филогенетическое дерево гена dnaJ показало, что этот изолят наиболее тесно связан с C. lapagei (AB272620).
Способ видовой микробиологической диагностики условно-патогенных энтеробактерий
Владельцы патента RU 2327160:
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и эпидемиологии. Сущность способа видовой микробиологической диагностики условно-патогенных энтеробактерий, выделенных от больных с гнойно-септической патологией и из внешней среды: после определения принадлежности к семейству у возбудителей изучают биологические признаки: способность к образованию сероводорода, индола, цитрата, наличие фенилаланиндезаминазы, желатиназы, уреазы, утилизацию лизина, сорбита, орнитина и аргинина, характер реакции с метиловым красным, наличие пигмента и подвижности. Исходя из результатов в тестах на способность к образованию сероводорода, цитрата, наличие фенилаланиндезаминазы, желатиназы, уреазы, характер реакции с метиловым красным представителя энтеробактерий относят к одной из групп. Дальнейшую видовую идентификацию внутри каждой группы проводят по оставшимся неучтенным признакам. Использование способа обеспечивает повышение степени достоверности видовой дифференциальной диагностики условно-патогенных энтеробактерий и сокращение сроков диагностики. 9 табл., 1 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и эпидемиологии, и может быть использовано при бактериологической диагностике и эпидемиологическом анализе внебольничных и нозокомиальных кишечных и гнойно-септических инфекций, вызванных условно-патогенными энтеробактериями.
Недостатком данного метода является отсутствие возможности дифференцировать некоторые роды и многие виды условно-патогенных энтеробактерий (Klebsiella sp, Enterobacter sp, Serratia sp, Proteus sp), а также значительное время на производство анализа (6-7 суток), связанное с большим количеством этапов исследования.
Его недостатком является большое количество идентифицирующих признаков, необходимых при исследовании.
Техническим результатом изобретения является повышение степени достоверности родовой и видовой дифференциальной диагностики условно-патогенных энтеробактерий и сокращение сроков диагностики.
Определение 13 ведущих (из более чем 40) биологических признаков условно-патогенных энтеробактерий (способность к образованию сероводорода, индола, цитрата, наличие фенилаланиндезаминазы, желатиназы, уреазы, утилизация лизина, сорбита, орнитина и аргинина, характер реакции с метиловым красным, наличие пигмента и подвижности) позволяет гарантировать достоверность и сокращение сроков диагностики.
Сущность изобретения заключается в следующем. Путем определения ведущих биологических свойств (способность к продукции сероводорода и индола, наличие фенилаланиндезаминазы, желатиназы, уреазы, образование цитрата, характер реакции с метиловым красным, наличие подвижности и пигмента, разложение сорбита, аргинина, лизина, орнитина) условно-патогенные энтеробактерии формируют в группы. Они представлены на чертеже и включают: энтеробактерии, образующие сероводород; энтеробактерии, не образующие сероводород и обладающие фенилаланиндезаминазой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу и обладающие желатиназой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу, желатиназу и уреазу; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу, уреазу и образующие цитрат; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу, уреазу, не образующие цитрат, положительные в реакции с метиловым красным; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу, уреазу, не образующие цитрат, отрицательные в реакции с метиловым красным. Дальнейшую видовую идентификацию проводят по оставшимся неучтенным признакам уже внутри каждой группы.
Способ осуществляется следующим образом.
У культуры-колонии микроорганизма, выросшей на среде первичного посева (обычно это 5% кровяной агар, агар Эндо, Плоскирева, Левина и др.) вместе с определением признаков семейства (при микроскопии грамотрицательные палочки, положительный тест с каталазой, окисление и ферментация глюкозы на среде Хью-Лейфсона) изучают особенности роста на комбинированном трехсахарном агаре Олькеницкого после инкубации в стандартном режиме. Питательный агар Олькеницкого одновременно служит средой накопления и средой по определению продукции сероводорода, что позволит ориентироваться в дальнейшем ходе исследований. В набор дифференцирующих тестов входят: определение фенилаланиндезаминазы, желатиназы, образование кислоты из сорбита, реакция с метиловым красным на среде Кларка, образование индола, определение подвижности, утилизация цитрата натрия на агаре Симонса, разложение лизина, орнитина, аргинина, уреазы, наличие и характер пигмента. Оценку проводят после 18-20 часовой инкубации при температуре 35-37°С. Наличие или отсутствие признаков включают представителя энтеробактерий в одну из групп: энтеробактерии, образующие сероводород; энтеробактерии, не образующие сероводород и обладающие фенилаланиндезаминазой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу и обладающие желатиназой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу, желатиназу, обладающие уреазой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу, уреазу и образующие цитрат; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу, уреазу, не образующие цитрат, положительные в реакции с метиловым красным; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу, уреазу, не образующие цитрат, отрицательные в реакции с метиловым красным. Дальнейшую идентификацию проводят по оставшимся неучтенным признакам внутри каждой группы с помощью дифференцирующих таблиц (1-9).
Таблица 2
Энтеробактерии, не образующие сероводород, обладающие фенилаланиндезаминазой
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
Орнит.
Сорб.
Инд
Метил красн.
Цитрат Симм.
Подв.
Уреаза
Лизин
Арг.
Желат.
Пигм.
Morganella morganii
+
—
+
+
—
+
+
—
—
—
Rhanella aquatilis
—
+
—
+
+
—
—
—
—
—
Providensia rettgeri
—
—
+
+
+
+
+
—
—
—
Providensia alcalifaciens
—
—
+
+
+
+
—
—
—
—
Providensia rustigianii
—
—
+
+
—
D
D
—
—
—
Providensia heimbachae
—
—
—
+
—
D
—
—
—
—
Tatumella ptyseos
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Pantoea agglomerans
D
—
—
D
+
+
—
—
—
—
Желтый
Таблица 3
Энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу, обладающие желатиназой
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
аргин.
орнит.
сорбит
цитрат Симон.
индол
подв.
метил. красн.
уреаза
лизин
пигмент
Enterobacter nimipressuralis
+
+
+
+
—
+
—
—
—
Serratia grimesii
+
+
+
+
—
+
+
—
+
Serratia liquefaciens
—
+
+
+
—
+
+
—
+
Serratia marcescens
—
+
+
+
—
+
—
—
4-
Красн.
Serratia odorifera (б.1)
—
+
+
+
D
+
+
—
+
Serratia proteamaculans
—
+
+
+
—
+
D
—
4-
Serratia odorifera (б.2)
—
—
+
+
D
+
+
—
+
Erwinia ananas
—
—
+
.
+
+
.
—
—
Желт.
Erwinia uredevora
—
—
+
.
+
+
.
—
—
Желт.
Serratia ficaria
—
—
+
+
—
+
D
—
—
Serratia rubideae
—
—
—
+
—
+
—
—
D
Красн.
Xenorabdus luminescens
—
—
—
D
D
+
—
—
—
Желт.
Xenorabdus nematophilus
—
—
—
—
D
+
—
—
—
Желт.
Erwinia amylovora
.
.
D
.
—
+
.
—
Arsenophonus nasoniae
.
.
.
.
—
—
—
.
.
Корич.
Таблица 4
Энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу и желатиназу, уреазоположительные
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
лизин
сорбит
подвиж.
метил. красн.
цитрат Симонса
индол
аргинин
орнитин
пигмент
Enterobacter gergoviae
+
+
+
—
+
—
—
+
Klebsiella oxytoca
+
+
—
—
+
+
—
—
Klebsiella planticola
+
-t-
—
+
+
—
—
—
Klebsiella pneumoniae
+
+
—
—
+
—
—
—
Serratia fonticola
+
+
+
+
+
—
—
+
Budvicia aquatica
—
—
D
+
—
—
—
—
Enterobacter hormaechei
—
—
+
D
+
—
+
+
Leclercia(Escherichia) adecarboxylata
—
—
+
+
—
+
—
—
Желт.
Xenorabdus luminescens
—
—
+
—
D
D
—
—
Желт.
Enterobacter cloacae
—
+
+
—
+
—
+
+
Enterobacter dissolvens
—
+
+
—
+
—
—
+
Citrobacter freundii
—
+
+
+
+
—
D
—
Citrobacter diversus
—
+
+
+
+
+
D
+
Citrobacter amalonaticus
—
+
+
+
+
+
+
+
Enterobacter asburiae
—
+
—
+
+
—
—
—
Таблица 5
Энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу и уреазу, образующие цитрат, орнитинотрицательные
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
подвиж.
сорбит
метиловый красный
индол
лизин
аргинин
пигмент
Citrobacter freundii
+
+
+
—
—
D
Cedecea neteri
+
+
+
—
—
+
Erwinia persicinus
+
+
—
—
—
—
Красн.
Enterobacter amnigenus(61)
+
—
—
—
—
—
Pantoae agglomerans
+
—
D
—
—
—
Желт.
Pantoae dispersa
+
—
D
—
—
—
Желт.
Ervinia cacticida
+
—
—
—
—
.
Ervinia mallotivora
+
—
—
—
.
.
Buttauxella agrestis
+
—
+
—
—
—
Xenorhabdus luminescens
+
—
—
D
—
—
Желт.
Klebsiella terrigena
—
+
D
—
+
—
Ervinia stewartii
—
+
+
—
—
—
Желт.
Klebsiella ozaenae
—
D
+
—
D
—
Ewingella americana
D
—
+
—
—
—
Serratia plymuthica
D
D
+
—
—
—
Красн.
Cedecea lapagei
+
—
.
—
—
+
Таблица 6
Энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу и уреазу, орнитинположительные
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
подвиж.
лизин
сорбит
индол
метиловый красный
аргинин
пигмент
Enterobacter asburiae
—
—
+
—
+
—
Klebsiella terrigena
—
+
+
—
D
—
Escherichia blattae
—
+
—
—
+
—
Klebsiella mobilis
+
+
+
—
—
—
Serratia fonticola
+
+
+
—
+
—
Kluyvera ascorbata
+
+
D
+
+
—
Escherichia fergusonii
+
+
—
+
+
—
Yokenella regensburgei
+
+
—
—
+
—
Enterobacter amnigenus (6.2)
+
—
+
—
D
D
Enterobacter cloacae
+
—
+
—
—
+
Enterobacter intermedius
+
—
+
—
+
—
Citrobacter freundtt
+
—
+
—
+
D
Citrobacter amalonaticus
+
—
+
+
+
+
Citrobacter diversus
+
—
+
+
+
D
Enterobacter sakazakii
+
—
—
—
—
+
Желт.
Enterobacter taylorae
+
—
—
—
—
+
Enterobacter hormaechei
+
—
—
—
D
+
Enterobacter amnigenus (6.1)
+
—
—
—
—
—
Cedecea divisae
+
—
—
—
+
D
Pantoae agglomerans
+
—
—
—
D
—
Желт.
Kluyvera cryocrescens
+
—
D
+
+
—
Erwinia mallotivora
+
—
—
.
.
Таблица 7
Энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу и уреазу, не образующие цитрат, положительные в реакции с метиловым красным, лизинположительные
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
подвижность
индол
сорбит
орнитин
аргинин
пигмент
Klebsiella terrigena
—
—
+
—
—
Escherichia blattae
—
—
—
+
—
Escherichia coli (неак.)
—
+
+
—
—
Escherichia coli
+
+
+
D
—
Escherichia fergusonii
+
+
—
+
—
Edwardsiella tarda (б.1)
+
+
—
+
—
Kluyvera cryocrescens
+
+
D
+
—
Edwardsiella hoshinae
+
—
—
+
—
Escherichia vulneris
+
—
—
—
D
Желт.
Erwinia mallotivora
+
—
—
.
.
Hafnia alvei
+
—
—
+
—
Таблица 8
Энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу и уреазу, не образующие цитрат, положительные в реакции с метиловым красным, лизинотрицательные
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
подвижность
индол
сорбит
орнитин
аргинин
пигмент
Citrobacter amalonaticus
+
+
—
+
+
Escherichia hermannii
+
+
—
+
—
Желт.
Kluyvera cryocrescens
+
+
D
+
—
Желт.
Escherichia vulneris
+
—
—
—
D
Erwinia mallotivora
+
—
—
.
.
Enterobacter intermedius
+
—
+
+
—
Erwinia stewartii
—
—
+
—
—
Желт.
Klebsiella rhinoscleromatis
—
—
+
—
—
Escherichia coli (неактивная.)
—
+
+
—
—
Moellerella wisconsensis
—
—
—
—
—
Leclercia adecarboxylata
+
+
—
—
—
Желт.
Budvicia aqvatica
D
—
—
—
—
Serratia plymuthica
D
—
D
—
—
Красн.
Таблица 9
Энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие желатиназу и уреазу, не образующие цитрат, отрицательные в реакции с метиловым красным
Вид
Дифференцирующие биохимические тесты
лизин
сорбит
подвижность
орнитин
агринин
индол
пигмент
Klebsiella terrigena
+
+
—
+
—
—
Obesumbacterium proteus
+
—
—
+
—
—
Hafhia alvei
+
—
+
+
—
—
Edwardsiella ictaluri
+
—
—
D
—
—
Xenorabdus luminescens
—
—
+
—
—
D
Желт.
Xenorabdus nematophilus
—
—
+
—
—
D
Желт.
Erwinia stewartii
—
+
—
—
—
—
Желт.
Erwinia mallotivora
.
—
+
.
.
—
Примеры конкретного выполнения.
Таким образом, у больного Р. с деструктивной пневмонией из крови был выделен возбудитель из семейства энтеробактерий, не образующий сероводород, не обладающий фенилаланиндезаминазой и желатиназой, уреазоположительный, разлагающий лизин, сорбит и цитрат натрия, неподвижный, не образующий индол, не утилизирующий аргинин и орнитин, что позволяет его отнести к роду Klebsiella, виду К.pneumoniae (sub. pneumoniae)
Таким образом, у больного М. с клиническим диагнозом «перитонит» из содержимого дренажа брюшной полости был выделен высокоподвижный представитель семейства энтеробактерий, образующий сероводород, имеющий фенилаланиндезаминазу, желатиназу, уреазу, орнитиндекарбоксилазу, положительный в реакции с метиловым красным, не утилизирующий аргинин, лизин и цитрат натрия, что позволило его отнести к роду Proteus, виду Р.mirabilis.
Используемый метод видовой дифференциальной диагностики энтеробактерий, указанный в заявке, проверен на штаммах Escherichia coli АТСС 29212, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, других контрольных штаммах НИИ им. Тарасевича и более чем на 800 культурах энтеробактерий, выделенных из клинического материала от больных с кишечными, гнойно-септическими инфекциями и с объектов внешней среды стационаров лечебно-профилактических учреждений.
Предложенный способ видовой дифференциальной диагностики условно-патогенных энтеробактерий информативен, так как позволяет отнести микроорганизм к одному из 27 родов и 85 видов семейства. Он достоверен, укорачивает сроки проведения анализа (2-3 дня вместо 4-5 дней при использовании прототипа), так как предполагает одновременную постановку и оценку всех идентифицирующих признаков. Относится к классическим бактериологическим методам исследования, не требует при постановке и идентификации дорогостоящего оборудования, удобен в работе, несложен в методическом плане. Поэтому без значительных материальных затрат и в короткие сроки может быть внедрен в работу любой бактериологической лаборатории.
Способ видовой микробиологической диагностики условно-патогенных энтеробактерий, выделенных от больных с гнойно-септической патологией и из внешней среды путем изучения их биологических признаков, определяющих принадлежность к семейству с использованием питательных сред и режима культивирования, отличающийся тем, что после определения принадлежности к семейству у возбудителей изучают биологические признаки: способность к образованию сероводорода, индола, цитрата, наличие фенилаланиндезаминазы, желатиназы, уреазы, утилизацию лизина, сорбита, орнитина и аргинина, характер реакции с метиловым красным, наличие пигмента и подвижности, и при наличии или отсутствии признаков представителя энтеробактерий включают в одну из групп: энтеробактерии, образующие сероводород; энтеробактерии, не образующие сероводород и обладающие фенилаланиндезаминазой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу и обладающие желатиназой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу, желатиназу, обладающие уреазой; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу, желатиназу, уреазу и образующие цитрат; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу, желатиназу, уреазу, не образующие цитрат, положительные в реакции с метиловым красным; энтеробактерии, не образующие сероводород, не имеющие фенилаланиндезаминазу, желатиназу, уреазу, не образующие цитрат, отрицательные в реакции с метиловым красным, дальнейшую идентификацию проводят по оставшимся неучтенным признакам внутри каждой группы с определением видовой принадлежности возбудителя.