Часто задаваемые вопросы
1. Мне посоветовали купить Ветом, а что это вообще такое?
2. Чем отличается Ветом 1, Ветом 2, Ветом 3 и Ветом 4?
Препараты серии «Ветом» различаются своим действующим началом. При их изготовлении используется два вида микроорганизмов: Bacillus subtilis рекомбинантный штамм ВКПМ В-10641 (DSM 24613), Bacillus amyloliquefaciens штамм ВКПМ В-10642 (DSM 24614), Bacillus amyloliquefaciens штамм ВКПМ В-10643 (DSM 24615). Все три штамма по принципу воздействия на организм приблизительно одинаковы, но разняться нарабатываемыми метаболитами и местом дислокации в отделах кишечника, тем самым специализацией по разным видам патогенной и условно-патогенной кишечной флоры.
В виду того, что микробный состав кишечников людей принципиально одинаков, но также разнится в деталях. Соответственно для того, чтобы оздоровительный эффект был максимально проявлен нужно из трёх ветомов определить тот, который этот максимальный положительный эффект обеспечит. Это достигается путём их последовательного приёма и соответственно фиксации своих ощущений.
3. Я хочу пропить все штаммы бактерий, по какой схеме это сделать?
4. Порошок Комарова можно пить вместе с Ветомом или вместо?
5. Как сочетать прием Ветом с едой?
6. Что выбрать: Ветом в жидком виде, в порошке или капсулах?
7. Если у меня сахарный диабет, какую форму выпуска мне выбрать?
8. Есть ли противопоказания для приема Ветом?
9. В инструкции написано, что курс 10 дней. Можно ли принимать дольше?
При длительном приёме Ветома 1.1 может возникнуть аутоиммунная реакция. Ветомы 2, 3, 4 применяются для коррекции микробного состава всех отделов тонкого и толстого кишечника. Их можно принимать как угодно долго с целью нормализации и поддержки биоценоза кишечника.
10. Когда я пропью курс Ветом, через какое время мне повторить курс?
11. Я начал пить курс Ветом, но в связи с обстоятельствами, пропустил один день. Мне нужно начать курс заново?
12. После начала приема, я почувствовал ухудшение самочувствия, вместо улучшения. Почему? Может бросить пить Ветом?
После начала приема Ветома происходит активация патогенной флоры, так сказать, борьба за выживание. Может усилиться метеоризм, начаться выделения из носа и появиться легкое недомогание. Обычно к 7 дню ситуация выравнивается, и полезная микрофлора преобладает над патогенной.
Если Вы действительно здоровы, то никаких особых эффектов после 10-и дневного курса Ветома Вы не заметите. Если Вы ошиблись в определении состояния своего здоровья, Вы обязательно это почувствуете в виде болезненных ощущений в тех или иных органах Вашего организма. В этом случае крайне желательно пройти обследование полное, либо частичное у профильного врача и принять решение о лечении найденного у Вас заболевания.
13. Я купил в аптеке пробиотик, который рекламируют по телевизору, можно ли его употреблять вместе с Ветом?
15. Мне назначили курс антибиотиков. Когда я могу начать прием Ветома?
16. Я не полностью использовал продукт, а срок годности уже закончился. Могу ли я им воспользоваться?
17. Как я могу быть уверен, что не нарвусь на подделку?
Также на каждой упаковке Ветом имеется серия и номер партии. По данной информации можно уточнить у завода производителя является ли данная продукция официальной.
19. Чем отличается косметическая глина между собой? Какой цвет выбрать?
Очищающие свойства глины известны людям столетиями. Различные разновидности оказывают на кожу неодинаковое воздействие: всё зависит от химического состава глины, то есть от минеральных и растительных веществ, которые в ней содержатся. Однако любая глина чрезвычайно эффективно впитывает содержащиеся в коже вещества.
Виды глины, чаще всего используемые в косметических целях: белая (каолин), голубая, зелёная, красная, розовая, чёрная.
Белая глина (каолин): хорошо подходит для кожи нормального и жирного типов. Белый порошок каолина, одного из самых мелкодисперсных видов глины, обладает неплохими подтягивающими свойствами. Имеет омолаживающий и очищающий эффект. Он не только поглощает загрязняющие кожу шлаки, но и улучшает в ней циркуляцию крови и лимфы. Белая глина – отличное противоугревое средство. Благодаря повышенному содержанию магния обладает лёгким отбеливающим эффектом. Каолин хорошо сочетается с биокефиром, мёдом и фруктами, используемыми при приготовлении масок для лица.
Голубая глина: дезинфицирующее свойство этой призвано решить многие косметические проблемы. Она активно борется с мимическими морщинами, устраняет прыщики и препятствует их появлению, осветляет пигментные пятна и улучшает кровообращение. Благодаря ей выравнивается цвет лица. Хорошо известны противоцеллюлитные свойства голубой глины. Также используется в масках для волос. И это неудивительно, ведь она обогащена минеральными солями, сдержит калий, радий и фосфат.
Зелёная глина: под её воздействием даже жирная и сухая кожа приобретают свойства нормальной. Богатейшее собрание микроэлементов, натуральных и химических соединений, таких как железо, кальций, магний, титан, кварц придают ей лечебные и антисептические свойства. Зелёная глина прекрасно справляется с пятнами и закупорками, подсушивает кожу, избавляя её от жирного блеска, но при этом сохраняет достаточный уровень влаги в клетках. В целом, является идеальной основой для домашних косметических масок.
Красная глина: применяется при приготовлении масок для сухого и гиперчувствительного типов кожи. Это идеальный противоаллергенный компонент. Своей окраской этот вид глины обязан своим составляющим: железу и магнию. Красная глина помогает избавиться от шелушения и зуда, снимает покраснения и борется с недостатками увядающей кожи.
Чёрная глина: это прекрасное средство против угрей. Она способна регулировать деятельность сальных желез и предотвращает появление прыщей, так как обеспечивает чистку лица, выталкивая все токсины и шлаки. Эта глина содержит стронций и кварц.
Bacillus subtilis штамм вкпм в 10641 что это
Как и зачем применять Ветомы
Биологически активные добавки к пище (БАД)
Биологически активные вещества для оздоровления людей (БАВ)
Косметические гели серии Биосептин
Косметическая продукция
Средства гигиены полости рта
Препараты для ветеринарного применения
Канцелярские товары
Биологически активные вещества для растений
Прочие вещества поверхностно-активные
Лосьон косметический для волос и кожи головы
Печатные рекламные материалы
Первая фирма в группе под общим названием «Исследовательский центр» создана в 1993 году.
В настоящее время на 35 000 м 2 расположены лабораторные и производственные подразделения предприятий. Принадлежащие группе фирм здания расположены на территории Научно-производственной зоны наукограда Кольцово в Новосибирской области.
Основные направления деятельности:
— научные исследования и разработка преимущественно микробиологических препаратов для охраны здоровья любых живых творений в том числе людей и животных;
— серийное производство препаратов на основе собственных патентов.
В настоящее время производятся:
— биологически активные добавки для охраны здоровья людей;
— лекарственные препараты для ветеринарного применения;
— препараты для органического земледелия;
— препараты, предназначенные для устранения экологических проблем таких как неприятные запахи, гнилостные процессы в водоёмах и др..
Производство всех препаратов соответствует правилам надлежащей производственной практики ( GMP ) и имеет соответствующие этому сертификаты.
Испытательная лаборатория НПФ «Исследовательский центр», аккредитованная Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации, осуществляет деятельность в областях:
— проведения широкого спектра лабораторной клинической диагностики;
— оценки безопасности и подлинности пищевых продуктов, биологически активных и пищевых добавок;
— определения безопасности и подлинности кормов, премиксов, сырья для их изготовления;
— оценки качества лекарственных средств для ветеринарного применения;
— детекции патогенных микроорганизмов III–IV группы;
— оценки санитарного состояния почвы и воды;
— бактериологического контроля в различных объектах внешней среды и учреждений.
Особенности продукции:
В качестве действующего начала в серийно выпускаемых препаратах используются преимущественно микроорганизмы рода Bacillus, выделенные из природной среды и обладающие свойством подавлять рост и развитие патогенной, условно–патогенной и гнилостной микрофлоры. В результате их применения микробный состав микробиологических сообществ, в которые они попадают, изменяется в сторону эволюционно нормального. Применительно к человеку и животным они являются дополнительным источником пробиотических микроорганизмов с заданными свойствами и обеспечивают при их приёме в составе различных препаратов оздоровление организма, что позволяет существенно улучшить качество жизни и соответственно её продолжительность. При внесении аналогичных бактерий в почву, увеличивается её плодородие, растения меньше болеют и больше плодоносят. Для получения оптимальных результатов использовать микробные препараты нужно регулярно.
Главные ссылки
Вход для пользователей
Давно интересует препарат Ветом, но сделать качественную оценку этому препарату не могу. Что думаете по этому поводу?
Препарат Ветом отечественной разработки ООО НПФ «Исследовательский центр» из наукограда Кольцово Новосибирской области.
С главной стр. сайта центра:
В настоящее время серийно производятся:
— биологически активные вещества и добавки к пище для оздоровления людей серий Ветом, Биосептин, порошок Комарова, капли назальные Ноздрин;
— гель косметический Биосептин;
— лекарственные препараты для ветеринарного применения серий Ветом, Биосептин, Велес;
— биологически активные вещества для растений серии Фитоп;
— мелки школьные «Антошка».
.
В качестве действующего начала в серийно выпускаемых препаратах используются преимущественно микроорганизмы рода Bacillus, выделенные из природной среды и обладающие свойством подавлять рост и развитие патогенной, условно–патогенной и гнилостной микрофлоры. В результате их применения микробный состав микробиологических сообществ, в которые они попадают, изменяется в сторону эволюционно нормального. Применительно к человеку и животным это проявляется в оздоровлении организма. При внесении аналогичных бактерий в почву, увеличивается её плодородие, растения меньше болеют и больше плодоносят.
Серийно производит биологически активные вещества для людей:
Ветом 1.1, Ветом 2, Ветом 3, Ветом 4, порошок Комарова, капли назальные Ноздрин, Ветом 1.23, Ветом 2.25, Ветом 2.26, Ветом 3.22, Ветом 4.24.
Из инструкции по применению:
Препараты Ветом 1.1, Ветом 2, Ветом 3, Ветом 4 одинаковы по принципу действия. В качестве действующего начала в них используются различные микроорганизмы, которые активны в различных отделах кишечника и продуцируют в окружающую среду различный спектр биологически активных веществ. В этой связи их итоговое воздействие на организм человека различается. Для получения максимального эффекта положительного воздействия необходимо поочерёдно применить все Ветомы и выбрать оптимальный для себя препарат.
Получается Ветом 2 = Ветом 3 + Ветом 4 и Ветом 2.25 = Ветом 3.22 + Ветом 4.24
2
. плазмида не нарушает днк клетки бактерии,а только дополняет своим присудствием в клетке (а это не одно и тоже).это похоже на то как мы занимаемся селекцией например яблони разрезая дичку и всавляя в неё почку или веточку,а затем получаем колеброванное дерево.так что не знаеш лучше не лезь куда не надо со своими выводами.
Штаммы бактерий bacillus subtilis и bacillus amyloliquefaciens, обеспечивающие восстановление микробиоценозов почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающие бактерицидной, фунгицидной и вирулицидной активностью, и препарат на основе этих штаммов
Владельцы патента RU 2482174:
Изобретения относятся к биотехнологии, ветеринарной медицине и защите растений. Штамм бактерий Bacillus subtilis IC-1435-1-1 депонирован в ВКПМ под регистрационным номером В-10641. Штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens IC-1436-1-23 депонирован в ВКПМ под регистрационным номером В-10642. Штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens IC-1437-1-23 депонирован в ВКПМ под регистрационным номером В-10643. Штаммы получены путем селекции и обеспечивают восстановление микробиоценозов почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладают бактерицидной, фунгицидной и вирулицидной активностью. Препарат на основе штаммов содержит наполнитель или воду с биомассой бактерий в споровой форме Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, или Bacillus amyloliquefaciens номером ВКПМ В-10642, или Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, или их смесью в соотношении 1:1:1 с титром каждого штамма бактерий не менее 1-10 4 КОЕ/г или 1·10 4 КОЕ/мл. Препарат обладает бактерицидной и фунгицидной активностью. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 9 ил., 12 табл., 10 пр.
Изобретение относится к штаммам микроорганизмов, стимулирующим восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) животных и человека, обладающим антибактериальной, фунгицидной и вирулицидной активностью, продуцирующим интерферон α-2 лейкоцитарный человеческий, и к препаративной форме на их основе и может быть использовано в биотехнологии, ветеринарной медицине, медицине и защите растений для:
получения препаратов против бактериальных, грибных и вирусных инфекций животных и растений; использования в качестве микробиологических удобрений, предназначенных для восстановления почвенной микробиоты; изготовления лечебно-профилактических препаратов для животных и человека, способных восстанавливать и поддерживать микробиоценоз желудочно-кишечного тракта; корректировать и поддерживать в норме иммунный статус.
Среди бактериальных фунгицидов, имеющих государственную регистрацию и внесенных в Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, в настоящее время нет фунгицида, обладающего столь широким спектром действия как в настоящем изобретении.
Препарат Интеграл (жидкость на основе штамма 24Д Bacillus subtilis) зарегистрирован в качестве средства, предназначенного для применения против болезней зерновых культур (пшеница, ячмень яровой), овощных культур (картофеля, томатов и огурцов) и для борьбы с антракнозом черной смородины.
Препарат Фитоспорин-М (порошок на основе штамма 24Д Bacillus subtilis) зарегистрирован для применения против болезней зерновых культур (пшеница, ячмень), бобовых (горох), овощных культур (картофель, капуста, томаты, огурцы), (патент РФ №2129375, МПК A01N 63/00, C12N 1/20, опубликован 27.04.1999).
Препарат Бактофит (смачивающийся порошок на основе штамма ИПМ 215 Bacillus subtilis) предназначен для защиты от болезней овощных культур, выращиваемых в открытом и защищенном грунте, цветочных культур, а также черной смородины от мучнистой росы.
Среди микробиологических удобрений аналогом заявляемого препарата является Бактофосфин, основу которого составляют почвенные микроорганизмы Bacillus mucilaginosus, предназначенные для обогащения почвы усвояемыми растениями формами фосфора, а также восстановления плодородия почв, повышения всхожести и урожайности на многих видах сельскохозяйственных культур в открытом и защищенном грунте. Авторами данного удобрения не приводятся конкретные данные по влиянию на показательные для плодородных почв группы микроорганизмов, а также влияния на урожайность культур.
Микробиологическое удобрение Байкал ЭМ-1 содержит консорциум представителей различных групп микроорганизмов, в том числе грибов, которые, при внесении в почву развиваясь как симбиотическое сообщество, призваны увеличить численность почвенной микрофлоры и, соответственно, плодородие и урожайность.
Однако вышеприведенные препараты обладают узким спектром действия. В отличие от вышеперечисленных заявляемый бактериальный препарат на основе заявляемого штамма Bacillus subtilis ВКПМ В 10641 зарекомендовал себя в лабораторных и полевых экспериментах как эффективное средство для борьбы с такими высоковредоносными болезнями малины и черной смородины, как пурпуровая пятнистость, фузариоз, альтернариоз, серая гниль, и не имеет аналогов на территории Российской Федерации.
Однако эти штаммы оказывают ограниченное действие, направленное на отдельных возбудителей грибковых болезней различных сельскохозяйственных культур.
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis ВНИИСХМ N131, используемый для получения препарата против возбудителей гнилей яблок и винограда при их хранении (Авторское свидетельство СССР №1706504, кл. A01N 63/00, 1992 г.). Однако данный штамм также оказывает ограниченное действие, направленное на отдельных возбудителей грибковых болезней сельскохозяйственных культур.
Однако вышеприведенные штаммы не были исследованы на антагонистическую активность и на способность восстанавливать микробиоценоз почвы и ЖКТ животных до эволюционно нормального, а также не обладают противовирусной активностью и не являются продуцентами интерферона.
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-7036 для получения препарата против грибковых болезней растений (Патент РФ №2086128, МПК A01N 63/00, C12N 1/20, опубликован 10.08.1997 г.). Штамм подвергался селекции на подавление бактериального роста. С лучшими вариантами проводили эксперименты по подавлению роста: Phytophthora infestans, Microsporium solani, Fusarium solani (возбудитель сухой гнили).
Наиболее близким аналогом (прототипом) является штамм бактерий Bacillus subtilis IC-16, полученный путем трансформации штамма В. subtilis ВКПМ В-7048 (IC-9) рекомбинантной плазмидой ДНК рВМВ 105, содержащий ген альфа-2 интерферона (патент РФ №2142287, МКИ C12N 1/20, опубл. 10.12.1999 г.). Полученный штамм IC-16 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ГНИИ Генетика под номером ВКПМ В-7092. Плазмида рВМВ 105 способна реплицироваться в бациллах и содержит в своем составе ген альфа-2- интерферона человека, промотор для экспрессии этого гена, сайт посадки рибосом (SD-сайт) и сигнальный пептид альфа-амилазы В. amyloliquefaciens для секреции интерферона в культуральную среду, а также обеспечения устойчивости к канамицину.
Однако штамм-прототип и препарат на его основе обладает недостаточно широким спектром антагонистической активности, а также не исследовался на способность восстановления микробиоценоза ЖКТ животных и почвы до эволюционно нормального.
Техническим результатом заявляемых технических решений является обеспечение восстановления до эволюционно нормального микробиоценоза почвы, ЖКТ животных и расширение спектра антибактериальной, фунгицидной и вирулицидной активности с использованием препарата, полученного на основе заявляемых штаммов.
Указанный технический результат достигается путем получения методом направленной селекции штаммов бактерий:
— Bacillus subtilis IC-1435-1-1, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной, фунгицидной и вирулицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10641 (справка о депонировании прилагается);
— Bacillus amyloliquefaciens IC-1436-1-23, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10642 (справка о депонировании прилагается);
— Bacillus amyloliquefaciens IC-1437-1-23, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10643 (справка о депонировании прилагается).
Указанный технический результат достигается также тем, что препарат характеризуется содержанием наполнителя или воды с биомассой бактерий в споровой форме Bacillus subtilis IC-1435-1-1 (ВКПМ В-10641), или Bacillus amyloliquefaciens IC-1436-1-23 (ВКПМ В-10642), или Bacillus amyloliquefaciens IC-1437-1-23 (ВКПМ В-10643), или их смеси в соотношении 1:1:1 с титром каждого штамма бактерий не менее 1·10 4 КОЕ/г или 1·10 4 КОЕ/мл.
В качестве порошкообразного сорбента препарат содержит порошок отрубей, или цеолит, или полисахарид, или моносахарид, или дисахарид, или смесь полисахарида с моносахаридом или дисахаридом в соотношении от 1:100 до 1:10.
Иммобилизация спор бактерий на сорбенте обеспечивает им дополнительную механическую защиту, предотвращает агрегирование спор и обеспечивает более равномерное их распределение в массе наполнителя.
При применении препарата крахмал (полисахарид) способствует ускорению прорастания спор бактерий, что повышает эффективность его действия.
Характеристика заявляемых штаммов. Штаммы бактерий Bacillus amyloliquefaciens подвергались селекции на подавление бактериального и грибного роста.
Штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 получен путем селекции рекомбинантного штамма бактерий Bacillus subtilis IC-16. Указанный штамм подвергался селекции на подавление бактериального и грибного роста, а также по признаку количества продуцируемого интерферона α-2 лейкоцитарного человеческого. Исходный рекомбинантный штамм-прототип Bacillus subtilis IC-16 (из которого селекцией получен заявляемый штамм Bacillus subtilis IC-1435-1-1) сконструирован путем трансформации штамма В.subtilis ВКПМ В-7048 (IC-9) рекомбинантной плазмидой ДНК рВМВ 105, содержащий ген альфа-2 интерферона (патент РФ №2142287, МКИ C12N 1/20, опубл. 10.12.1999 г.) и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ГНИИ Генетика под номером ВКПМ В-7092. Плазмида рВМВ 105 способна реплицироваться в бациллах и содержит в своем составе ген альфа-2- интерферона человека, промотор для экспрессии этого гена, сайт посадки рибосом (SD-сайт) и сигнальный пептид альфа-амилазы В.amyloliquefaciens для секреции интерферона в культуральную среду. С лучшими клонами проводили эксперименты по подавлению роста: энтеробактерий, грамположительных кокков, неферментируюших бактерий, грибов рода Candida, возбудителей фузариоза растений, пурпуровой пятнистости малины, септориоза малины. Определение активности интерферона проводили на культуре клеток с использованием вируса энцефаломиокардита мышей.
Штамм Bacillus amyloliquefaciens IC-1436-1-23 получен путем селекции штамма бактерий Bacillus subtilis IC-9. Указанный штамм подвергался селекции на подавление бактериального и грибного роста. Исходный штамм-прототип Bacillus subtilis IC-9 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ГНИИ Генетика под номером ВКПМ В-7048. В связи с изменением методов идентификации микроорганизмов в Российской Федерации и других странах была выполнена работа по повторному определению видовой принадлежности заявляемого отселектированного штамма IC-1436-1-23 во всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) методом детекции по 16s pPHK, который был идентифицирован как Bacillus amyloliquefaciens с присвоением заявляемому штамму в коллекции ГНИИ Генетика номера ВКПМ В-10642.
Штамм Bacillus amyloliquefaciens IC-1437-1-23 получен путем селекции штамма бактерий Bacillus licheniformis IC-1. Указанный штамм подвергался селекции на подавление бактериального и грибного роста. Исходный штамм-прототип Bacillus licheniformis IC-1 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ГНИИ Генетика под номером ВКПМ В-7038. В связи с изменением методов идентификации микроорганизмов в Российской Федерации и других странах была выполнена работа по повторному определению видовой принадлежности заявляемого отселектированного штамма IC-1437-1-23 во всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) методом детекции по 16s pPHK, который был идентифицирован как Bacillus amyloliquefaciens с присвоением заявляемому штамму в коллекции ГНИИ Генетика номера ВКПМ В-10643.
Культурально-морфологические и биохимические свойства штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643.
Штаммы не являются зоопатогенными и фитопатогенными.
Штаммы продуцируют биологически активные метаболиты, в том числе антибиотики и ферменты широкого спектра действия, подавляющие рост патогенной и условно-патогенной бактериальной и грибной микрофлоры, штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 продуцирует интерферон α-2 лейкоцитарный человеческий.
Для длительного хранения штаммов бактерий споровую массу лиофильно высушивают. Для массового размножения бактерий используют мясопептонный бульон. Культивирование проводят при температуре 37°С.
Определение количества единиц активности интерферона α-2 лейкоцитарного человеческого, продуцируемого заявляемым штаммом Bacillus subtilis ВКПМ В-10641.
Пяти беспородным белым мышам массой 18-20 г с помощью автоматической пипетки вводили перорально 0,1 см 3 водной суспензии клеток штамма в концентрации 50 мг/см 3 в течение 5 сут.
Через 5 сут от начала введения штамма у 5 мышей отбирали для исследования образцы (отдельно от каждого животного). Животных подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации. Асептически вскрывали брюшную полость и извлекали по 0,5 см дистального и проксимального отделов кишечника. Извлеченные фрагменты кишечника помещали в предварительно взвешенную стерильную микропробирку с налитой в нее 0,5 см 3 среды Игла MEM. Микропробирку с фрагментами кишечника взвешивали. Все пробы до анализа хранили при температуре минус 80°С. Образцы кишечника гомогенизировали в микропробирках с помощью тефлонового гомогенизатора. Осветляли центрифугированием при 10000 об/мин в течение 15 мин. Супернатант дополнительно осветляли и стерилизовали фильтрацией.
В лунки планшета добавляли по 0,05 см 3 раствора нейтрального красного (1,1 г/см 3 ) в среде Игла MEM. Инкубировали в течение 90 мин. Содержимое лунок удаляли и лунки промывали трехкратно физиологическим раствором. Планшеты подсушивали в ламинарном потоке воздуха. В каждую лунку добавляли 0,1 см 3 этанола (подкисленного соляной кислотой до рН 4,0). Инкубировали в течение 30 мин и измеряли оптическую плотность при длине волны 490 нм.
Для определения активности (титра) индикаторного вируса готовили десятикратные разведения культуры вируса, полученной из коллекции культур, в поддерживающей среде. Далее в культуральные планшеты вносили по 100 мм 3 приготовленных разведении, используя на каждое разведение не менее четырех лунок. Инокулированные и контрольные культуры клеток инкубировали в течение 24 час при температуре 36,0±1,0°С в атмосфере с 5,0±0,5% CO2. За титр вируса принимали величину, обратную разведению препарата, при которой клеточная культура в 50% лунок оказалась полностью пораженной цитопатическим действием вируса.
,
Для определения активности интерферона в фильтрате гомогенатов фрагментов проксимального, дистального отделов кишечника экспериментальных животных и его содержимого готовили их двукратные разведения и двукратные разведения контрольного образца интерферона в поддерживающей среде (на 4 разведения ниже и выше предполагаемого титра).
Учет и анализ результатов измерений проводили на вертикальном многоканальном спектрофотометре-флюориметре FL-600 с помощью программного обеспечения КС-4 Bio-Tek Ink., USA. Концентрация человеческого альфа-2 интерферона, полученная методом подавления ЦПД, была не менее 30 МЕ/г исследуемого образца, что на порядок выше, чем в исходном штамме-прототипе В.subtilis ВКПМ В-7092.
Пример 1. Исследование непатогенности штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643.
Исследование проведено в лаборатории биотехнологического контроля НПФ «Исследовательский центр».
Патогенность каждого микроорганизма оценивали по выживаемости инфицированных животных, их внешнему виду и поведению, высеваемости бактерий из крови и органов в различные сроки после заражения, а также макроскопической картине внутренних органов при вскрытии животных в конце срока наблюдения.
В работе использованы лабораторные животные двух видов: нелинейные белые мыши массой 18-20 г в количестве 40 особей обоего пола и крысы породы Вистар массой 180-200 г в количестве 40 особей обоего пола. Из животных формировали опытную и контрольную группу по 20 особей в каждой. Для выявления проникновения бактерий в органы экспериментальных животных животным из опытных групп на протяжении 60 суток перорально вводили суточную культуральную жидкость бактерий, полученную путем культивирования исследуемого штамма на мясопептонном бульоне.
Животных из опытных и контрольных групп забивали по следующей схеме:
После проведения вскрытия посев органов (сердце, легкое, печень, селезенка) и крови производили на мясопептонный и кровяной агары в чашки Петри методом отпечатков. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37±1°С в течение 24 часов. Результат учитывали по наличию/отсутствию колоний на поверхности питательной среды в чашке Петри.
В результате проведенных исследований установлено нижеследующее. В течение опыта не зарегистрировано гибели животных. Не отмечено каких-либо изменений в их внешнем виде и поведении. При макроскопической оценке внутренних органов во все периоды проведения вскрытий патологических изменений не обнаружено.
Микробиологический анализ показал, что внутренние органы и кровь были стерильными в опытном и контрольном вариантах во все периоды проведения исследований.
На основании отсутствия гибели животных и каких-либо изменений в их внешнем виде и общем поведении, на протяжении 60-дневного наблюдения, отрицательных результатов микробиологического анализа сердца, легких, печени, селезенки и крови сделан вывод, что штаммы бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 являются непатогенными.
Пример 2. Исследование антагонистической активности штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643.
Полученные путем селекции штаммы бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 характеризуются высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно патогенных микроорганизмов.
Антагонистическую активность в отношении тест-культур проверяли методом отсроченного антагонизма. В качестве тест-штаммов использовали Staphylococcus aureus, Candida albicans, Klebsiella pneumonia, Shigella flexneri, Shigella sonnet, Yersinia pseudotuberculosis, Serratia marcescens, Escherichia coli, Enterococcus spp.
Используемые тест-штаммы удовлетворяли следующим требованиям: находились в S-форме, имели типичные морфологические и ферментативные свойства.
Исследование антагонистической активности заявляемых штаммов бактерий Bacillus subtilis и Bacillus amyloliquefaciens производили на мясопептонном агаре.
Рецептура мясопептонного агара на 1 дм 3 :
Для проведения испытания от каждой серии препарата отбирали 3 пробы по 1 г.
Учет результатов проводили через 8 часов инкубирования при 37±1°С по величине зон угнетения роста тест-штаммов. Контролем роста культур патогенов служил их параллельный высев на чашки Петри с той же плотной средой (мясопептонным агаром) без исследуемой ассоциации антагонистов. Полученные в опыте данные представлены в таблицах 1, 2 и 3.
Таким образом, исследуемые штаммы бактерий проявляют антагонистическую активность в отношении широкого спектра патогенных и условно патогенных микроорганизмов.
Пример 3. Методика культивирования бактерий Bacillus subtilis и Bacillus amyloliquefaciens для получения микробной биомассы.
Для получения биомассы спор бактерий штаммы Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 культивировали на жидкой питательной среде следующего состава:
Пример 4. Получение готовой формы препарата на основе бактерий штаммов Bacillus subtilis и Bacillus amyloliquefaciens.
Остаточная влажность препарата составляет не более 5%.
Пример 5. Составы препаратов
5.1. Состав 1. Водный раствор биомассы спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром спор не менее 1·10 4 КОЕ/мл. Данный раствор хранят в темном месте не более 1-2 суток.
5.2. Состав 2. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с цеолитом с титром спор не менее 1·10 6 КОЕ/г.
5.3. Состав 3. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 не менее 1·10 6 КОЕ/г со смесью крахмала и пудры на основе сахарозы в соотношении 1:100.
5.4. Состав 4. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 с порошком из отрубей с титром спор не менее 1·10 6 КОЕ/г.
5.5. Состав 5. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 с титром спор не менее 1·10 6 КОЕ/г со смесью крахмала и пудры на основе сахарозы в соотношении 1:50.
5.6. Состав 6. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 с титром спор не менее 1·10 6 КОЕ/г со смесью крахмала и пудры на основе сахарозы в соотношении 1:10.
5.7. Состав 7. Биомасса спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 в соотношении 1:1:1 с титром спор каждого вида бактерий не менее 1·10 4 КОЕ/г со смесью крахмала и пудры на основе глюкозы в соотношении 1:20.
5.8. Состав 8. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 с крахмалом с титром не менее 1·10 6 КОЕ/г.
5.9. Состав 9. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 с сахарозой с титром не менее 1·10 6 КОЕ/г.
5.10. Состав 10. Смесь биомассы спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 с глюкозой с титром не менее 1·10 6 КОЕ/г.
5.11. Состав 11. Водный раствор биомассы спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 с титром спор не менее 1·10 4 КОЕ/мл. Данный раствор хранят в темном месте не более 1-2 суток.
5.12. Состав 12. Водный раствор биомассы спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 с титром спор не менее 1·10 4 КОЕ/мл. Данный раствор хранят в темном месте не более 1-2 суток.
5.13. Состав 13. Водный раствор биомасс спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 в соотношении 1:1:1 с титром спор каждого вида бактерий не менее 1·10 4 КОЕ/г. Данный раствор хранят в темном месте не более 1-2 суток.
5.14. Состав 14. Водный раствор биомассы спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 с титром спор не менее 1·10 6 КОЕ/мл.
5.15. Состав 15. Водный раствор биомассы спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 с титром спор не менее 1·10 6 КОЕ/г.
5.16. Состав 16. Водный раствор биомассы спор бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 с титром спор не менее 1·10 6 КОЕ/г.
Пример 6. Данные по хранению сухой формы препарата на основе штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643.
Для установления срока годности и условий хранения препарата проведены соответствующие исследования.
В течение 96 месяцев хранения сухой формы препарата при температуре 30±0,5°С титр и антагонистическая активность препарата не изменились, что подтверждает высокую термостабильность препаратов в споровой форме, обеспечивающую значительное упрощение технологии их применения в медицине, ветеринарии и растениеводстве.
Пример 7. Данные по ингибирующей активности штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 в отношении фитопатогенов.
Для испытания штаммов Bacillus subtilis и Bacillus amyloliquefaciens в отношении способности ингибировать фитопатогенов использовали метод агаровых блоков. Суспензию препарата с титром 1×10 8 КОЕ/см 3 вносили в мясопептонный агар, остуженный до температуры 36±1°С. Для выращивания фитопатогенов использовали картофельно-глюкозный агар.
Инокулированную штаммами (каждым в отдельности) среду разливали в чашки Петри и на застывшую поверхность, в центр помещали блок диаметром 10 мм, вырезанный из колонии фитопатогена.
Учет результатов проводили с периодичностью в 3 дня. Активность штамма учитывали по изменению диаметра колонии гриба в сравнении с контролем (среда без внесения штаммов). На основании полученных данных определяли ингибирующую активность, которую рассчитывали по формуле:
В таблице 4 приведены значения показателей ингибирующей активности в отношении грибных фитопатогенов испытуемых штаммов бактерий, полученные в эксперименте.
Таким образом, заявляемые штаммы бактерий Bacillus subtilis и Bacillus amyloliquefaciens проявляет антагонистическую активность по отношению к обозначенным в таблице 4 грибным фитопатогенам.
Пример 8. Данные полевых испытаний по изучению влияния препаратов на основе штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 на пораженность малины пурпуровой пятнистостью и на поражение смородины септориозом.
Для испытания штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 в отношении болезней малины и смородины в открытом грунте использовали промышленные посадки малины сорта Зоренька Алтая и смородины сорта Софья. В качестве химического эталона использовали Топаз в концентрации 0,1%. Обработку проводили суспензией препаратов с титром 10 6 спор/мл.
Обработку посадок проводили в июле и июне согласно схеме опыта:
— штаммы Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМВ-10642;
Поражение листьев смородины септориозом учитывали по следующей шкале:
Степень повреждения побегов малины оценивали по специальной 4-бальной шкале для пурпуровой пятнистости малины:
Развитие болезни определяли по следующей формуле:
,
Распространенность рассчитывали по формуле:
,
Биологическую эффективность биопрепаратов определяли по формуле:
,
Результаты полевых опытов представлены в таблицах 5 и 6.
| Таблица 5. | |||
| Влияние заявляемых препаратов на основе штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 на поражение малины пурпуровой пятнистостью (СХА «Сады Сибири», 2009 год). | |||
| Вариант | Распространенность, % | Развитие, % | Биологическая эффективность, % |
| Контроль | 75,0 | 25,0 | — |
| Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 | 27,3 | 11,4 | 54,4 |
| Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 | 38,6 | 9,7 | 61,2 |
| Топаз 0,1% | 38,6 | 10,8 | 56,8 |
| НСР05 | 2,0 |
Биологическая эффективность составила 54,4-61,2% в зависимости от срока проведения учета. Прибавка урожайности составила 0,3 т/га. Обработка насаждений смородины штаммами бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 в полевом опыте снижала развитие болезни в 2,2 раза. Биологическая эффективность составила 41,8-59,7% в зависимости от срока проведения учета.
| Таблица 6. | |||
| Влияние заявляемых препаратов на основе штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 на поражение смородины септориозом (СХА «Сады Сибири», 2009 год) | |||
| Вариант | Биологическая эффективность, %* | ||
| Сроки учетов | |||
| 27 июня | 4 июля | 11 июля | |
| Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 | 56,5 | 48,4 | 46,8 |
| Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 | 59,7 | 43,5 | 41,9 |
| Топаз 0,1% | 64,5 | 56,5 | 56,5 |
Пример 9. Исследования заявляемого препарата в виде микробиологического удобрения
По итогам трехлетних экспериментов выявлено положительное влияние Фитопа 8.67 при его использовании для обработки семян и подкормки вегетирующих растений в фазу кущения на урожайность и качественные характеристики яровой пшеницы. Полученные данные представлены в таблицах 7, 8 и 9.
В таблице 7 приведены данные по влиянию Фитопа 8.67 на массу 1000 зерен пшеницы. Наибольшее достоверное увеличение массы тысячи зерен отмечено в варианте подкормки вегетирующих растений Криаллом (на 5,3 г по сравнению с контролем 1 и на 4,4 г по сравнению с контролем 2). Также отмечено достоверное (НСР) по сравнению с контролем 1 и контролем 2 увеличение массы тысячи зерен в вариантах опыта с обработкой семян на 1,2 г и 0,3 г и обработкой семян с последующей подкормкой в период кущения Фитопом 8.67 на 1,7 г и 0,8 г. Хорошо показал себя вариант, в котором Фитоп 8.67 и препарат Криалл использовали совместно для обработки семян перед посевом. Однако внекорневая подкормка посевов в период кущения смесью этих препаратов отрицательно повлияла на массу тысячи зерен, которая снизилась по сравнению с обоими контрольными вариантами. Масса тысячи зерен в контроле 2 превышала аналогичное значение в контроле 1 на 0,9 г. Остальные варианты опыта показали более низкое значение массы тысячи зерен по сравнению с контролем 2, но более высокое по сравнению с контролем 1.
В таблице 10 представлены данные по влиянию препарата (состав 13) Фитоп 8.67 и препаратов на основе штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 (состав 12), Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (состав 1), Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 (состав 11) на различные группы почвенных микроорганизмов.
Обработка семян препаратом (состав 13) Фитоп 8.67 на основе смеси штаммов, а также препаратами на основе монокультур штаммов Bacillus subtilis (состав 12) и Bacillus amyloliquefaciens (препараты составов 1 и 11) позволяет достоверно повысить общее микробное и грибное число, а также количество нитрификаторов и аммонификаторов в почве, а также способствует увеличению количества зимогенной микрофлоры. Аналогичные данные получены при применении Фитопа 8.67 для внекорневой подкормки растений пшеницы в период вегетации и совместном действии при обработке семян и подкормке.
| Таблица 10. | ||||||
| Численный состав микрофлоры почвы (фрактал, в среднем за 3 года испытаний). | ||||||
| Вариант опыта | ОМЧ | ОГЧ | Нитрификаторы | Аммонификаторы | Автохтонная микрофлора | Зимогенная микрофлора, суммарно |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| Контроль 1 (без обработок) | 0,4 | 1 | 0,2 | 1,7 | 5,1 | 7,4 |
| Контроль 2 (обработка семян химическим протравителем Витал-ТТ) | 1,0 | 0,1 | 0,1 | 1,8 | 0,4 | 3,1 |
| Обработка семян Фитопом 8.67 | 5,3 | 4,2 | 1,5 | 2,7 | 0,8 | 35,1 |
| Обработка семян Азофитом | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,9 | 1,4 | 2,9 |
| Обработка семян Криаллом | 12,5 | 3,1 | 2,8 | 23,0 | 1,9 | 8,2 |
| Обработка семян Фитопом 8.67 совместно с Криаллом | 5,5 | 6,7 | 1,3 | 1,3 | 1,2 | 17,6 |
| Подкормка Фитопом 8.67 | 5,0 | 1,8 | 2,4 | 10,0 | 1.8 | 85,5 |
| Подкормка Азофитом | 14,5 | 2,8 | 7,3 | 1,2 | 3,0 | 143,1 |
| Подкормка Криаллом | 2,0 | 2,0 | 1,0 | 0,1 | 0,1 | 0,2 |
| Подкормка Фитопом совместно с Криаллом | 2,1 | 1,0 | 4,6 | 17,0 | 1,0 | 15,3 |
| Обработка семян Фитопом 8.67 и подкормка Фитопом 8.67 | 3,9 | 1,5 | 3,5 | 3,0 | 0,3 | 4,8 |
| Обработка семян Азофитом и подкормка Азофитом | 7,5 | 1,8 | 4,7 | 3,2 | 0,1 | 0,8 |
| Обработка семян Криаллом и подкормка Криаллом | 4,1 | 1,7 | 6,0 | 5,0 | 2,0 | 34,1 |
| Обработка семян Фитопом 8.67 совместно с Криаллом и подкормка Фитопом 8.67 совместно с Криаллом | 3,3 | 1,7 | 4,2 | 7,0 | 0,1 | 1,5 |
| Обработка семян штаммом бактерий Bacillus subtilis ВКПМВ-10641 (состав 12) | 4,3 | 11 | 1,5 | 2,3 | 5,9 | 45,9 |
| Обработка семян штаммом бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (состав 1) | 1,2 | 2,2 | 0,6 | 2,1 | 4,0 | 90,3 |
| Обработка семян штаммом бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 (состав 11) | 2,0 | 1,1 | 1,4 | 1,0 | 4,7 | 116,6 |
Пример 10. Данные по восстановлению микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных на смоделированном в лабораторных условиях сальмонеллезе.
Были сформированы следующие группы: контрольная; 1 опытная (лечебная), в которой Ветом 1.23 в дозе 75 мл/кг задавали перорально в течение 10 дней после инфицирования; 2 опытная (лечебная), в которой Ветом 1.23 задавали перорально в дозе 100 мл/кг в течение 10 дней после инфицирования; 3 опытная (профилактическая), в которой Ветом 1.23 задавали перорально в дозе 75 мл/кг за 10 дней до инфицирования; 4 опытная (профилактическая), в Ветом 1.23 задавали перорально в дозе 100 мл/кг за 10 дней до инфицирования. Повторность в опыте применялась четырехкратная.
Установлено, что в лабораторных условиях при искусственно смоделированном на крысах сальмонеллезе Ветом 1.23 обладает как лечебной, так и профилактической эффективностью.
В результате трехкратного определения содержания микробных клеток сальмонелл в фекалиях крыс установлено (фиг.1), что в двух опытных группах за период эксперимента количество КОЕ/г сальмонелл снижалось.
Снижение титра сальмонелл относительно контроля на порядок зарегистрировано на 1 день после начала лечения (фиг.1) при даче препарата в дозе 100 мл/кг живой массы и на 10 день после начала лечения при даче препарата в дозе 75 мл/кг, что свидетельствует о терапевтической эффективности Ветома 1.23 при лечении сальмонеллеза.
Из данных диаграммы (фиг.2) видно, что наибольший титр IgG в разведении 1:128000 в контрольной группе наблюдался на 10 день эксперимента. Ввиду значительного варьирования показателей в остальных разведениях ввиду высокой концентрации сыворотки крови в дальнейшем было принято решение о целесообразности учета только данных разведении 1:128000.
В 1 и 2 опытных группах (фиг.3, 4) уровень IgG в сыворотке значительно увеличился к последнему дню эксперимента.
Для сравнения величин изменения титров IgG в сыворотке крови животных 1, 2 опытных и контрольной групп была составлена общая диаграмма (фиг.5, разведение 1:128000).
Учитывая изменения количества микробных единиц сальмонелл в кале зараженных животных и сопоставляя их с данными определения титра IgG, можно сделать вывод, что использование Ветома 1.23 в терапии сальмонеллеза оказывает терапевтический эффект и обеспечивает переболевание животных сальмонеллезом в более легкой (абортивной) форме.
Наиболее высокий титр IgG наблюдался у животных, получающих Ветом 1.23 в дозе 75 мл/кг.
При определении профилактической эффективности Ветома 1.23 в дозировках препарата 75 (3 группа) и 100 (4 группа) мл/кг массы тела животного анализ изменения количества микробных единиц сальмонелл в кале зараженных животных проводили по группам дважды: через 4 дня после инфицирования (4-й день эксперимента) и через 10 дней после инфицирования (24-й день эксперимента). Определение изменения титра IgG в сыворотке крови крыс мы проводили трижды: до начала применения препарата (1-й день эксперимента); через 4 дня после инфицирования (4-й день эксперимента) и через 10 дней после инфицирования (14-й день эксперимента).
В результате установлено (фиг.6), что животные 3 группы в начале заболели сальмонеллезом, однако, к концу эксперимента они перестали выделять сальмонеллу с калом, что может свидетельствовать об их клиническом выздоровлении.
В 4 группе в фекалиях крыс сальмонелл не обнаружено за весь период эксперимента, что свидетельствует о хорошей иммунной защите к инфицирующему агенту. В отличие от контрольной группы, где количество КОЕ/г сальмонелл в фекалиях крыс не снизилось за все время проведения эксперимента. Следовательно, Ветом 1.23 является эффективным средством для профилактики сальмонеллеза при использовании его в дозе 100 мл/кг.
При изучении динамики изменения титра IgG в сыворотке крови установлено (фиг.7), что в 3 группе (доза препарата 75 мл/кг) титр IgG в разведении 1:128000 на 4 день заражения был незначительно выше, чем в 1 день эксперимента (что может объяснить заболевание животных в первые дни заражения), затем, к 24 дню эксперимента, их титр значительно увеличился, и, возможно, поэтому в этот период мы не обнаружили микробные единицы сальмонелл в кале.
В 4 опытной группе (доза препарата 100 мл/кг) титр IgG спустя 4 дня после заражения был сравнительно выше, чем в 1 день (фиг.8), до начала применения штамма, а к 24 дню эксперимента титр значительно увеличился.
Для сравнения величин изменения титров IgG в сыворотке крови животных 3, 4 опытных и контрольной групп была составлена общая диаграмма (фиг.9, разведение 1:128000).
Таким образом, Ветом 1.23 является эффективным препаратом для профилактики сальмонеллеза, применение которого в дозе 100 мл/кг живой массы с титром не менее 1×10 6 КОЕ/мл не только позволяет избежать инфицирования (животные остаются клинически здоровыми), но и создает значительную напряженность специфического иммунитета, позволяя поддерживать высокий уровень иммуноглобулина IgG в сыворотке крови.
Для препаратов на основе штаммов Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (состав 15) и Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 (состав 16) было определено влияние на микрофлору желудочно-кишечного тракта цыплят-бройлеров кросса ISA F-15 (табл.11, 12). Так, ежедневное применение препарата состава 15 на основе штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 в 3-й опытной группе в течение всего периода выращивания цыплят (35 суток) в наибольшей степени способствовало вытеснению условно-патогенных бактерий. Применение препарата состава 16 на основе штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 в течение 5 дней с 5-дневным перерывом во 2-й опытной группе приводило к снижению численности условно-патогенных бактерий и незначительному сокращению численности симбиотических лакто- и бифидобактерий. В наибольшей степени влияние на видовой состав микрофлоры кишечного тракта цыплят изучаемый биопрепарат оказал в 1-й опытной группе при скармливании его в течение 10 дней. В этом случае наблюдали резкое сокращение численности условно-патогенных бактерий в период скармливания штамма и резкое увеличение количества симбиотических лакто- и бифидобактерий через 10 дней после отмены препарата. При этом количество лакто- и бифидобактерий, а также штаммов кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью увеличилось в 100-1000 раз по сравнению с исходным уровнем.
Данные, представленные в таблице 11, показывают, что применение препарата на основе штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (состав 15) не оказывает отрицательного воздействия на видовой состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта цыплят. Более того, его введение в организм животных способствует повышению как абсолютного, так и относительного количества симбиотических микроорганизмов с нормальной ферментативной активностью.
По результатам изучения влияния препарата состава 16 на основе штамма Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 (таблица 12) на микрофлору желудочно-кишечного тракта цыплят-бройлеров кросса ISA F-15 отмечено увеличение количества бифидобактерий, лактобактерий и кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью в опытных вариантах 1-3 (применение штамма в виде культуральной жидкости с титром 1×10 9 КОЕ/мл ежедневно (первые 5 дней совместно с антибиотиками); ежедневно с антибиотиками; через день (первые 5 дней совместно с антибиотиками) в дозе 3 мкл/кг.
Показания к применению (рекомендательные). Препараты на основе штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643 рекомендуется использовать в птицеводстве и животноводстве, растениеводстве для:
— профилактики и лечения дисбактериозов сельскохозяйственных и диких птиц, в том числе кур, уток, гусей, индеек, цесарок и других; повышения естественной резистентности организма птиц; устранения иммунодефицитных состояний, вызванных инфекционными (вирусы, бактерии, простейшие, внутриклеточные) и неинфекционными (некачественные корма, скученное содержание, стресс вследствие несоблюдения температурных режимов содержания) факторами; увеличения сохранности поголовья; увеличения яйценоскости; получения дополнительных привесов бройлеров; снижения конверсии кормов; уменьшения времени выращивания птицы;
— профилактики и лечения у всех видов продуктивных сельскохозяйственных животных: дисбактериозов; инфекционных заболеваний вирусной, бактериальной и протозойной этиологии; профилактики вирусных заболеваний и иммунодефицитных состояний; повышения сохранности молодняка в ранние периоды развития; повышения продуктивности; получения дополнительных привесов молодняка мясного животноводства; улучшения качества и сортности молока и мяса; продления фертильности маточного поголовья;
1. Штамм бактерий Bacillus subtilis IC-1435-1-1, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной, фунгицидной и вирулицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10641.
2. Штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens IC-1436-1-23, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10642.
3. Штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens IC-1437-1-23, обеспечивающий восстановление микробиоценоза почвы и желудочно-кишечного тракта животных, обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью и депонированный во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-10643.
4. Препарат, обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью, характеризующийся содержанием наполнителя или воды с биомассой бактерий в споровой форме Bacillus subtilis ВКПМ В-10641, или Bacillus amyloliquefaciens номером ВКПМ В-10642, или Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, или их смесь в соотношении 1:1:1 с титром каждого штамма бактерий не менее 1·10 4 КОЕ/г или 1·10 4 КОЕ/мл.
5. Препарат по п.4, отличающийся тем, что в качестве наполнителя он содержит порошкообразный сорбент.
6. Препарат по п.5, отличающийся тем, что в качестве порошкообразного сорбента он содержит порошок из отрубей, или цеолит, или полисахарид, или моносахарид, или дисахарид, или смесь полисахарида с моносахаридом, или смесь полисахарида с дисахаридом в соотношении от 1:100 до 1:10.
